鸬鹚公开 | 一种RBP4抗体胶乳微球偶联方法

导读

试剂准备：

耗材准备：

偶联瓶及对应磁力转子、不同量程加样枪及枪头、不同规格的EP管、称量勺及称量纸若干、不同规格试剂瓶等。

仪器运行参数调试：

磁力搅拌器，运行参数：650rpm

恒温振荡器，运行参数：35℃、200rpm

1、准备10mL规格的偶联瓶1个，瓶身标记“项目-序号-日期”,选择合适大小的磁力转子放入该偶联瓶中。

2、根据实验工艺，加入855uL 90nm微球（货号：LCM4090-1），再加入395uL活化缓冲液（货号：LCHH001-5），盖好偶联瓶瓶盖后放入恒温振荡器，运行参数为：35℃、200rpm。

3.1、在活化剂1（货号：LCHH003-2）中加入2mL活化缓冲液（货号：LCHH001-5）,制成活化剂1溶液，颠倒混匀。

3.2、在活化剂2（货号：LCHH004-2）中加入2mL活化缓冲液（货号：LCHH001-5）,制成活化剂2溶液，颠倒混匀。

4、取出第2步骤时放入恒温振荡器中的10mL偶联瓶，置于打开的磁力搅拌器上，打开偶联瓶瓶盖，依次加入70uL的活化剂1溶液，70uL的活化剂2溶液，盖好偶联瓶瓶盖，放入恒温振荡器，运行参数为：35℃、200rpm，并立即开始倒计时12分钟。

5、在这12分钟等待期间准备抗体:取1个 5mLEP管，加入2mL交联缓冲液（货号：LCBB02b-10）,加入930uL的RBP4抗体（货号：LCA1003A-1），盖好EP管盖，颠倒混匀。

6、在倒计时结束时，取第4步骤恒温振荡器中的10mL偶联瓶置于打开的磁力搅拌器上，打开偶联瓶瓶盖，加入6mL 交联缓冲液（货号：LCBB02b-10）。立即用200uL量程的加样枪将第5步骤的EP管中的抗体逐滴滴加到该10mL偶联瓶中。

7、盖好偶联瓶瓶盖，并用封口膜将瓶口缠住。置于恒温振荡器，运行参数为：35℃、200rpm，计时2-4个小时。

8、计时结束后，取出恒温振荡器中的10mL偶联瓶，置于打开的磁力搅拌器上，打开偶联瓶瓶盖，加入250uL交联缓冲液（货号：LCBB02b-10）,1mL保护剂（货号：LCFB05b-1.5），5分钟后即可装入试剂瓶，在试剂瓶瓶身及瓶盖用记号笔标记“项目-序号-日期”。

9、上机生化仪检测该试剂性能。

注意事项

1、恒温振荡器需提前设置好运行参数，避免因实验温度达不到而影响试剂性能。

2、配制好的活化剂1和活化剂2必须在15min内使用，先加活化剂1，再加活化剂2。

3、进行合成多组R2试剂时，在滴加抗体时尽量每组同步进行。抗体必须一滴一滴加入，不可滴加太快。

以下性能指标测试参数：

测试仪器：⽇⽴7180

加样⽐：2/180/60

波⻓：660nm

1、校准曲线：鸬鹚⽣物RBP4多克隆抗体制备成试剂在胶乳增强⽐浊平台低端灵敏度⾼，⾼端梯度分明，易于开发宽线性⾼质量试剂。

2、临床⽐对：鸬鹚⽣物RBP4多克隆抗体制备试剂与进⼝D抗体制备试剂⽐对测试342例样本，相关性R²>0.98，相关性好。

3、特殊临床样本测试： 从市售两个公司试剂盒临床测值偏差＞10%的临床样本中，挑选出⾼中低12个样本进⾏测试，鸬鹚抗体和进口D抗体相关性良好，和国产Z公司抗体偏差较⼤。

4、临床线性：可达到140mg/L，满⾜⾼性能试剂要求。

5、抗原过剩：当抗原浓度到350mg/L时，其测定值不会落⼊线性上限内，可避免某些⾼值临床样本测值出现被低估或假阴性。