虽晚必达 | 解锁具有活性的CRP重组蛋白
替代CRP天然蛋白的不二选择
目前市面上主要的CRP蛋白是从人体血清或体液中纯化而来,但天然提取存在诸如血液/体液供应风险、样本批间差异、污染风险、纯度不够、提取困难等问题。相较之下,重组CRP蛋白可有效规避以上问题。
由于CRP的特殊五聚结构,在体外异源表达系统中表达也存在一些难点:
• CRP主要积累在不溶性组分中,需要使用去垢剂或分子伴侣促进蛋白质溶解或折叠。
• CRP包含两个参与形成二硫键的半胱氨酸残基,需要使用特殊的缓冲液或分子伴侣维持氧化条件,以保证正确的蛋白质折叠。
• 在体外表达的产量较低且不容易获取高纯度蛋白。
鸬鹚生物通过尝试,成功攻克了CRP体外表达及纯化的难题,实现了从哺乳动物细胞培养上清液大量获取高活性、高纯度、高稳定性CRP蛋白的目标。
测试数据
功能稳定性测试:
采用鸬鹚校准品稀释液,稀释成高中低三个CRP校准品浓度。置于37℃环境中,在不同时间点,采用外购同批次商品化CRP胶乳标准试剂进行测试,各浓度偏差均在±5%范围内。
抗原线性测试:
1、采用鸬鹚校准品稀释液,按比例将不同批次CRP重组抗原进行稀释,采用外购商品化CRP胶乳标准试剂进行测试,拟合曲线强制过原点后,相关系数R>0.99相关性良好。
2、采用鸬鹚校准品稀释液,按比例进行CRP重组抗原稀释,采用外购不同来源厂家商品化CRP胶乳标准试剂进行测试,拟合曲线强制过原点后,相关系数R>0.99相关性良好。
C-反应蛋白(CRP)是一种参与宿主防御的血浆蛋白,广泛存在于脊椎动物和无脊椎动物中。它是五聚蛋白家族的成员,由五个相同的23-kDa亚基非共价连接形成环状五聚体结构,每个亚基都能依赖Ca2+与死亡或垂死细胞(以及某些类型的细菌)表面的磷酰胆碱结合,增强巨噬细胞的吞噬作用,参与清除坏死和凋亡细胞,从而激活补体系统。
CRP是人类血清中的主要急性期蛋白,由肝细胞在IL6、IL1和糖皮质激素等炎症因子的诱导下合成。在正常情况下,CRP水平低于10mg/L,但在急性炎症或细菌感染等疾病状态下会显著升高,因此被认为是炎症的良好生物标记物。
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