蛋白生物学技术服务

一、技术原理与实验步骤

将目的基因片段连接至合适的原核表达载体后，转化到菌株内，随后利用菌自身的蛋白表达系统通过温度和诱导剂的控制，诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质，将表达样品进行SDS-PAGE 以检测表达蛋白质。原核表达系统是至今为止最为成熟可靠的蛋白表达系统，其优点是实验周期短、成本低、产量高。

二、服务流程

1.依据客户提供的蛋白基因、载体要求，设计克隆方案，构建原核表达载体。可提供6xHis、GST、MBP等携带标签及肠激酶、凝血酶等蛋白酶切除标签蛋白的表达载体，提供多种选择；

2.将构建好的质粒转化到菌株内，优化温度、IPTG浓度等条件诱导蛋白表达，SDS-PAGE验证；

3.对蛋白性质进行分析，选择合适的方法分离纯化蛋白；

4.依据客户要求如蛋白纯度、是否需要带标签、带何种类型的标签、蛋白溶解缓冲液要求，是否冻干等提供最终蛋白产品，附加载体构建报告、SDS-PAGE检测报告、目的基因质粒、重组细菌菌株、重组表达菌株等信息。

三、大肠杆菌表达系统

大肠杆菌蛋白表达系统是目前应用最广泛，也是最经济实惠的蛋白表达系统。E. coli具有遗传背景清楚、细胞增殖快、表达量高、稳定性好和抗污染能力强等特点，适用于多种属蛋白的表达，尤其对小分子蛋白的生产具有极大的优势，但也存在一些问题，如易形成包涵体和含有内毒素等。泰斯拓生物提供从密码子优化到重组蛋白表达/纯化的一站式服务以及内毒素去除等附加服务，以满足不同的定制需求。我们拥有丰富的E. coli 可溶性蛋白表达/纯化及蛋白复性经验，拥有多种E. coli细胞株和表达载体，可为客户提供优质的原核蛋白表达服务。