你知道使用胶原检测试剂盒的操作步骤吗
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胶原检测试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被人I型胶原蛋白(COL-1)抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人I型胶原蛋白(COL-1)浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人I型胶原蛋白(COL-1)含量。
胶原检测试剂盒的操作步骤：
1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍)；标准品和待测样本孔均再加酶标工作液50μL；空白对照孔不加。
4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
6、显色：每孔先加入显色剂A液50μL，再加入显色剂B液50μL，37℃避光显色15min。
7、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。
8、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。
9、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。
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