层浪流式笔记-间充质干细胞标志物检测

近些年，以干细胞治疗为基础的再生医学逐渐发展起来。间充质干细胞（mesenchymal stem cell, MSC）作为干细胞的一种，正受到全世界科学家的关注。

间充质干细胞（MSC）是一类存在于多种组织（如骨髓、脐带、胎盘、脂肪等），具有自我更新能力和多向分化潜力的成体干细胞。具有易获取、低免疫原性、低致瘤性、良好增殖率等多个特点，因在免疫调节和组织再生上的巨大潜力而受到更多的关注。

Duc M Hoang教授2022年发表了一篇综述[1]，对间充质干细胞（MSC）在各系统疾病治疗领域的临床研究成果进行了系统性的总结，包括神经系统疾病、肺功能障碍、代谢/内分泌相关疾病、生殖障碍、皮肤烧伤和心血管疾病等。文中提到，在临床试验中，MSC治疗是安全的，不过仍需要进行大规模的临床试验。MSC来源特异性的疾病治疗也是研究者关注的一个方向。

截止2023年8月底，我国已有近70种MSC药物获得药物临床试验申请（IND）受理（数据来源于国家药品监督管理局药品评审中心），涉及较多的适应症，包括膝骨关节炎、间质性肺病、移植物抗宿主病及急性呼吸窘迫综合征。

图1：MSC来源及分化（来源：DOI:10.1080/17474124.2018.1393332）

在间充质干细胞的研究中，细胞的鉴定是很重要的一个环节。

自1991年MSC的概念提出后，科学家们使用不同的分离培养方法，用不同的标志物来研究MSC，没有形成统一的鉴定标准，增加了MSC研究的难度。因此，国际细胞治疗协会（ISCT）在2006年定义了MSC的最低标准[2]，是目前被广泛接受的一种鉴定方法， 如Table1所示：

接下来小编为您展示下层浪LongCyte™流式细胞仪检测MSC表面标志物的数据。

实验方案：

图2：MSC表面标志物配色方案

染色步骤：

Part. 1 取传代培养的人脐带间充质干细胞（h UCMSCs），胰酶消化收集细胞，加入PBS调整细胞浓度为10 x106 cells/ mL；

Part. 2 取7个流式管，每管分别加100ul细胞悬液，空白管不加抗体，其余的管按照抗体使用说明书分别加入相应荧光抗体CD90-FITC、CD105-PE、CD73-APC、CD45-PE-Cy7、CD34-APC-Cy7、HLA-DR-AF700，混匀，室温避光孵育30 min；

Part. 3 加2mlPBS，1500r，离心5 min，弃上清液，加入300ulPBS重悬细胞；

Part. 4 上流式细胞仪，检测细胞表面标志物的表达。

数据展示：

图3：MSC表面标志物检测（A：主细胞群；B-G：分别是阳性指标CD73、CD105、CD90和阴性指标HLA-DR、CD34、CD45的百分比）

圈门逻辑：

01  通过FSC-H/SSC-H设门，排除碎片，圈出主细胞;

02  建立直方图，横坐标分别选择CD73、CD105、CD90、HLA-DR、CD34、CD45；

03  在仪器软件上选择图层编辑功能，与空白管对应指标的直方图进行叠加，得到每个指标的百分比。

总结:

1.层浪LongCyte™流式细胞仪软件操作简单，可直接获得峰形叠加图，进行归一化和平滑处理，对流式图进行美化处理；

2.有批量操作功能，可批量自动上样，批量分析数据，批量导出流式图，节约整体实验时间。

 层浪临床型LongCyte™3光14色流式细胞仪可满足多种荧光染料同时使用，欢迎大家使用层浪流式细胞仪，共同探索更多的多色流式检测方案。 

  图4：层浪生物LongCyte™3光14色流式细胞仪

参考文献：

（1）Duc M. Hoang , Phuong T. Pham,etal.Stem cell-based therapy for human diseases.
Signal Transduct Target Ther.2022 Aug 6;7(1):272.

（2）Dominici, M，Le Blanc, K,etal.Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.

（3）F Gao 1, S M Chiu,etal.Mesenchymal stem cells and immunomodulation: current status and future prospects.Cell Death Dis,2016 Jan 21;7(1):e2062.

（4）Hajir Ibraheim 1, Chiara Giacomini,etal.Advances in mesenchymal stromal cell therapy in the management of Crohn's disease.Expert Rev Gastroenterol Hepatol,2018 Feb;12(2):141-153.