​病证结合模型

病证结合模型有几种可能的造模途径：

其一，病即是证，根据临床观察结果，某一疾病多属于中医某证，如甲状腺功能亢进与阴虚；慢性溃疡性结肠炎与脾虚等。这种造模方法其实没有中医的干预因素，难以得到认可。

其二，同一个疾病的不同造模方法会造成不同的证，如广州中医学院发现不同方法造成之消化性溃疡病模型对不同的辨证施治方药反应不同，认为其属于不同的证候；又如用二肾一夹法形成的高血压模型属肾阴虚型，用肾上腺再生法形成的高血压模型属于肾阳虚型。

其三，由病致证，即先制作疾病基础模型，再用中医因素制作证型模型。

其四，由证致病，即先采用中医因素制作证型基础模型，然后再制作疾病模型，如在建立脾虚模型基础上对动物接种肿瘤细胞而形成脾虚型肿瘤模型。无论采用何种方法，由于“证”的前提“病”被加以限定，不仅使许多模糊繁杂的因素变得相对明晰，易于控制。且增加了模型的变量，为研究提供了丰富的信息。

下面将报道较多的病证结合模型分述如下：

一、类风湿关节炎（痹病）痹证模型

类风湿关节炎是一种以多关节炎为代表的自身免疫性疾病，中医辩证主要有寒痹、热痹及久痹等证型。

【造模机制】目前有关痹证（arthromyodynia)模型的制作思路大多是采用西医的类风湿关节炎疾病模型（主要是胶原诱导性关节炎）作基础，给予符合中医病因病机理论的复合因素作证型造模手段，从而制作出类风湿关节炎中医证型模型。中医认为痹病的病因是在肝肾亏虚的基础上，风寒湿邪或风湿热邪入侵，闭阻经络所致。因此，寒痹（coldhypochondrium protrusion)(寒湿痹）的造模手段是采用人工风寒湿环境或联合葡萄球菌肠毒素B(SEB,作为超抗原激活免疫反应），热痹（湿热痹）则采用人工风湿热环境加SEB刺激，久痹（肾虚痹证）则采用切除卵巢去势（造成肾虚）作为证型造模手段。

1.类风湿关节炎中医寒湿痹证模型

【模型特点】与单纯风寒湿刺激胶原诱导性关节炎模型比较，该模型的关节炎症积分、关节滑膜的炎症细胞浸润程度和软骨侵蚀程度均加重，而关节表面温度却降低。血清类风湿因子水平显著升高，而三碘甲状腺原氨酸（T3)含量却降低。

【模型评估和应用】既往多认为中医风寒湿或风湿热邪导致痹证是指单纯的气候条件，而本模型证实单纯的人工风寒湿气候条件并不能加重大鼠的关节炎症，只有当风寒湿气候条件与外界感染源或感染源的代谢产物（如SEB)同时作用时才能加重关节炎症。胶原诱导性关节炎的发病与大鼠的品系遗传背景有关，同时低温环境会明显刺激雌性鼠的血清雌二醇分泌并抑制炎症，故雌性大鼠不适宜作风寒湿痹造模。

风寒湿痹证型的判断不能完全依靠造模的人工气候手段，炎症关节的表面温度是重要指标。但关节急性炎症状态时其表面温度仍然较正常关节高，风寒湿痹模型鼠只是比单纯胶原诱导性关节炎模型的关节表面温度低而炎症程度却相当，还需要更好的证型判断指标。该模型可用于中医痹证病因病机研究、针对类风湿关节炎寒湿痹证型的方药药理药效学研究。

此外，将人工环境中的温度控制在36~38℃可以制作类风湿关节炎湿热痹证模型。

2.类风湿关节炎中医肾虚痹证模型

【造模机制】肾藏先天之精，主生殖，卵巢显然是中医肾的重要功能基础之一。临床上卵巢功能低下者多属于中医肾虚证。因此，可采用切除卵巢制作中医肾虚模型。研究表明，类风湿关节炎的发病和病情演变与内分泌激素特别是雌激素和孕激素的变化也有密切关系，这是制作肾虚痹证模型的主要机制。

【模型特点】卵巢切除可使小鼠关节肿胀程度、滑膜组织增生、软骨损伤及软骨下骨的破坏均明显加重，血清骨钙素和肿瘤坏死因子的含量则显著增加，雌二醇水平明显下降。关节炎小鼠脾单个核细胞的IL-2和IL-6含量显著增加。

【模型评估和应用】中医肾虚的内涵丰富，不单指生殖功能减退。肾虚证的内分泌实质除了性激素改变外，还包括下丘脑－皮质－肾上腺－甲状腺轴功能减退等。因此，该模型用于评估肾虚痹证有一定局限性。中医认为“肾主骨”，去势鼠本身是骨质疏松症的较好模型，因此该肾虚痹证模型用于探讨类风湿关节炎的骨质疏松和骨质破坏具有优势。

多发性肌炎（polymyositis)是一种与自身免疫有关的特发性横纹肌炎症，属于中医肌痹范畴。因脾主肌肉，为气血生发之源，所以脾虚是该病的基本证候。

【造模机制】利用家兔骨骼肌匀浆加弗氏佐剂结合饥饱失常的方法形成多发性肌炎脾虚证模型，观察其在一般情况、肌酶、肌肉与肺组织病理方面的改变。

【造模方法】实验动物：豚鼠。每周于豚鼠背部皮下注射1次，每次注射剂量肌匀浆0. 2ml+完全弗氏佐剂0. 1ml,共8周。配合单日禁食，双日油脂饮食加青草。观察指标：肌酶谱，肌酸肌酶，肌酸磷酸肌酶，乳酸脱氢酶，谷草转氨酶，豚鼠肌肉病检。

【模型特点】4~5周后豚鼠出现明显倦息、便溏、食欲下降、被毛松散蓬乱、眼眯无神、活动少面迟缓、生长缓慢、消瘦等。四肢对称性肌无力，重者站立困难，呈缓慢进行性进展。肌酶谱呈显著上升趋势，肌肉病理呈现明显的变性、姜缩和炎症改变。并有20%-30%出现不同程度的间质性肺炎。

【模型评估和应用】该模型利用家免骨骼肌匀浆加弗氏佐剂结合饥饱失常的方法形成多发性肌炎牌虚证模型，从肌酶谱、肌酸肌酶、肌酸磷酸肌酶、乳酸脱氢酶、谷草转氨酶、豚鼠肌肉病检各项指标的结果，尤其是部分豚鼠间质性肺炎的出现，提示免疫法结合饥饱失常法造模是基本成功的。但由于死亡率较高，怎么样选择一种更好的复合型模型还有待研究。本模型可用于中医多发性肌炎病理生理研究。

三、高血压（眩晕）阴虚阳亢证模型

高血压属于中医“眩晕”、“头痛”的范畴，传统中医学认为肝肾阴虚、肝阳上亢是高血压病的主要发病机制，也是高血压病常见证候之一。

【造模机制】目前常见的高血压模型有：

①高血压阴虚模型：二肾一夹法；

②高血压肝阳上亢型模型：双肾双夹法并灌服附子汤；

③高血压阴阳两虚模型：自发性高血压型（SHR型）；

④高血压实火型模型：稳定性高血压（MH型）；

⑤高血压阳虚模型：肾上腺皮质再生型（Skelton型）；

⑥高血压血瘀证模型：二肾一夹法。

下面介绍通过二肾一夹方法建立高血压阴虚阳亢证动物模型。

【造模方法】实验动物：Wistar雄性大鼠。大鼠用戊巴比妥钠（40mg/kg)腹腔注射麻醉后，沿腹中线打开腹腔，经腹膜后近主动脉侧分离左肾动脉，用0. 2mm银夹狭窄左肾动脉，右肾不触及，术后缝合腹腔并注射青霉素10万U/只，常规饲养。待造模1周，以尾动脉收缩压较术前升高22. 5mmHg以上，并超过135mmHg者为模型复制成功。

【模型特点】大鼠在造模后逐渐显现烦躁不安，同笼大鼠频繁咬斗或频咬铁笼、易激惹。体重下降、体温升高、饮水量增多，血压明显升高。血清肿瘤坏死因子及白细胞介素1的含量、血浆cAMP、cGMP也明显升高，血压明显升高。

【模型评估和应用】以往有研究认为，二肾一夹肾性高血压大鼠模型属中医阴虚证型。本实验通过采用二肾一夹法狭窄肾动脉后，大鼠即表现出体温上升、体重减轻、毛发干枯、易激惹程度增高等类似于人类阴虚阳亢的表现。从中医病因学的角度看，肾为人体真阴之所在，本模型肾动脉狭窄后，血液运行不畅，肾脏阴血供给不足而致阴虚。中医理论认为，阴虚与阳亢是同一问题不同方面，有阴虚则必有阳亢，故该模型大鼠既表现有阴虚的一面，如体重减轻、毛发干枯，又表现为有阳亢的一面，如体温上升、易激惹程度增高。同时，各项实验室指标也显示该模型的造模成功。主要用于高血压病病理、生理的研究。

四、冠心病（胸痹心痛）气虚血瘀证模型

冠心病属于中医“胸痹心痛”的范畴，而气虚血瘀证是其主要证候之一，劳累过度，饮食不节，过食肥甘，损伤脾胃，或者年老体虚，脏腑功能虚损，正气亏虚，气虚血瘀，痹阻心脉。

【造模机制】目前，冠心病基础研究中，冠心病动物造模大多采用单一因素造模，即急性心肌缺血模型或高脂血症模型，均不足以反映冠心病的临床发病特点。因此，本文介绍中西医结合复合模型造模方法。

【模型特点】造模后第9周家免出现倦息。乏力、嗜卧懒动喜温暖、舌淡或淡胖有齿痕，脉虚无力：部分出现有毛发不荣、肌肤甲错、唇舌青紫，部分有麽斑出现。主动脉病理见主动脉内膜及其下肌层内有大量泡沫状细胞堆积，并形成脂斑。心脏病理可见心外膜下心肌内血管腔偏心型脂斑形成。血管周围有大量脂肪组织充填；肌层血管内膜及全部肌层被脂质及“甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇胶样物”所代替或血管壁脂斑形成，血管腔高度狭窄甚至完全堵塞。血生化分析可见各项指标不同程度明显升高，符合冠心病诊断标准。

【模型评估和应用】该模型采用了中西医结合复合模型复制方法。利用高脂饮食和放血的方法建立气虚血瘀证的动物模型。从实验研究血生化指标、结合病理结果分析以及家兔出现的临床表现，证明冠心病、心绞痛气虚血瘀证模型的建立是成功的。本模型多用于冠心病病理、生理研究。

五、脑梗死（脑卒中）后遗症气虚血瘀证模型

脑梗死属于中医“中风”（stroke)的范畴，是一种严重威胁人类健康的疾病，气虚血瘀是其重要病机之一。国内外复制脑卒中动物模型的方法基本上是属于脑卒中急性期。对脑卒中后遗症，既没有复制出动物模型，更没有将模型与中医辩证结合起来。

【造模机制】通过开颅法制作大鼠右侧中动脉梗死模型，并通过再灌注，和随机电脉冲刺激仪不断刺激大鼠，从而建立脑梗死后遗症气虚血瘀证的复合模型。

【模型特点】刺激后大鼠出现毛发暗淡无光，卷曲，精神萎靡，表情惊恐，消瘦，肢体无力，摄食减少或左上肢内收无力，攀爬时向一侧倾斜，下肢外展，内收困难，走路或跳跃时跛行，提起鼠尾时不能正常卷曲身体，只能不停抖动身体，雄鼠左侧睾丸萎缩，两侧睾丸大小不一。

【模型评估和应用】通过多因素复合方法制作大鼠脑梗死后遗症“气虚血瘀”病理模型，能量代谢出现了显著障碍，由于“气虚”的中医证候表现主要是推动无力，生化乏源，代谢受阻，从而影响脏腑功能，为脑梗死（脑卒中）气虚血瘀证模型提供了判断“气虚”指标的客观依据。本模型用于中医关于脑梗死病理、生理研究。

六、血小板减少性紫癜（血证）脾不统血证模型

血小板减少性紫癜（ITP)是以出血及外周血血小板减少，骨髓巨核细胞数正常或增多伴有成熟障碍为主要表现的常见出血性疾病，为自身免疫病。属祖国医学血证（hemorrhagic diseases)范畴。脾虚失于统摄是该病的主要病机之一。

【造模机制】采用现代医学免疫法腹腔注射抗血小板血清，结合中医苦寒泻下法灌胃番泻叶水浸剂，建立ITP牌不统血证动物模型。

【模型特点】灌胃番泻叶后第3天起出现泻泄，为不成型黏液便，同时有食少、纳呆。第4天逐渐出现精神萎靡，眯眼，扎堆，反应迟钝，行走迟钝，甚至行走不稳，毛色枯槁，散乱竖起，饮食饮水量减少，逐渐消瘦。第2次腹腔注射APS起，出现明显皮下紫癜，以注射部位、四肢、尾部为重。实验室检查出现血小板、血红蛋白下降，骨髓巨核细胞增多，脾脏、胸腺、肾上腺均重明显增加。

【模型评估和应用】该研究采用现代医学免疫法结合中医苦寒泻下法，建立ITP脾不统血证动物模型。根据小鼠表现，血小板明显减少，骨髓巨核细胞数明显增多，外周T淋巴细胞亚群明显升高，与ITP临床相符，提示ITP脾不统血证的动物模型符合ITP疾病特点。方法可靠，重现性强。为中医药研究治疗脾不统血证提供了可靠的动物模型。本模型适用于中医药研究血小板减少性紫癜和脾不统血证。

七、黄疸阴黄证模型

黄疸即高胆红素血症,可见于多种疾病发展过程之中，中医根据其病因病机的不同分为阳黄、阴黄两类。阳黄的病机主要是湿热或热毒淤积，阴黄主要是寒湿淤积。

【造模机制】本文介绍的造模方法机制是在用异硫氰酸－1-萘酯（ANIT)灌胃诱导大鼠肝损伤的基础上，加寒湿环境因素或结合中药大黄灌胃及寒湿环境因素，建立中医阴黄证黄疸动物模型。

【模型特点】造模阶段大鼠一般状态的观察，从第3天起造模大鼠即出现眯眼，活动减少，成群蜷卧，喜扎堆，弓背神萎，被毛松散，无泽晦滞，便条状稀便，肛周污秽，体重明显下降，肛温降低。第48小时黄疸模型大鼠巩膜黄染，耳背皮肤略显黄色，尾黄，小便色深黄。

【模型评估和应用】该动物模型符合黄疸特点，即造模大鼠表现为β-葡萄糖醛酸酶含量升高、葡萄糖醛酸转移酶活性及D-木糖含量下降，肝病理组织学改变符合肝内胆汁淤积黄疸的病理改变，符合ANIT灌胃造模方法的主要特点；同时，模型大鼠出现明显寒湿证主证及客观指标变化。符合中医学传统病因病机理论，方法可靠，重现性强，与人类黄疸相似。可应用于中医学传统病因病机理论的研究、退黄中药的退黄机制及退黄中药的研制。

八、慢性腹泻脾虚泄泻模型

脾虚泄泻（splenasthenic diarrhea)是一种以腹泻、体重下降、畏寒、倦怠等为主要表现的中医病证，包括西医中的慢性腹泻、溃疡性结肠炎、肠易激性综合征、消化道肿瘤等多种疾病。

【造模机制】采用番泻叶加醋酸制作脾虚泄指模型，其机制是根据胛虚泄泻的病因、病理变化请李东垣“苦寒之伤押胃”，利用番泻叶致化醋酸局部灌肠能损伤肠黏膜的特点而制作。

【模型特点】造模第2天出现精神倦怠、懒动、拱背，第3天出现明显扎堆、眯眼，第5天毛色枯黄、脱毛、耳尾色淡。醋酸灌肠后出现血便，随后有便溏、懒动等症状。

【模型评估和应用】该动物模型符合脾虚泻泄的特点，造模大鼠表现出似临床脾虚泄泻证的一般症状，如腹泻、眯眼、懒动、扎堆、毛无光泽、耳色淡白、体重下降等，及免疫功能、脾脏指数、胸腺指数、血清淀粉酶活性降低。琥珀酸脱氢酶的显著降低。与临床上脾虚泄泻证的证候及客观指标变化合，符合中医学传统病因病机理论。该造模方法可用于病因病机、病理变化的研究及治疗脾虚泄泻证有效药物筛选及新药的开发方面的研究。