临床PCR实验的假阳性、假阴性及曲线异常原因剖析
体系内部因素
体系外部因素
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SDS:离子去污剂,0.01%即可完全抑制PCR反应,0.005%可显著降低产量
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苯酚:0.5%即可完全抑制PCR反应,0.2%可显著降低产量
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乙醇:大于1%的浓度可抑制PCR反应,但在某些体系里又能增加产量
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异丙醇:抑制作用比乙醇稍强
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乙酸钠:大于5mM时抑制PCR反应
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氯化钠:大于25mM时抑制PCR反应(生理盐水无影响)
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EDTA:0.5mM可使PCR产物减少,1mM完全没有PCR产物
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血红素(heme)-来源:血液,大于1mg/ml抑制PCR反应
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氯高铁血红素(hemin):大于0.1ng/μl抑制PCR反应
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丹宁酸(tannic acids):大于0.1ng/μl抑制PCR反应
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肝素:大于0.15IU/ml抑制PCR反应
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尿素-来源:尿,大于20mM时产生抑制
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腐殖质-来源:土壤,植物材料,自然界水
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植物多糖-来源:粪便,植物多糖
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聚苯乙烯,聚丙烯-来源:紫外线照射塑料管
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胆酸盐-来源:粪便
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胶原质-来源:组织
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靛青染料-来源:粗斜纹棉布,牛仔裤
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蛋白酶-来源:牛奶
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钙离子-来源:牛奶,骨头
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铁离子-来源:血液
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二甲苯胺
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溴酚兰
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胆红素(bilirubin)
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其他抑制剂
临床PCR常见问题
1
假阳性问题
2
假阴性问题
说明:文中资料人工整理而成,若有纰漏还请补充
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