技术简介

近年来，科学家们发现了一种可逆的RNA甲基化—m6A，即RNA分子腺嘌呤第6位氮原子上发生甲基化修饰(N6-methyladenosine，m6A)。研究发现，m6A是真核生物mRNA上常见的一种转录后修饰，m6A在细胞加速mRNA代谢和翻译，以及在细胞分化、胚胎发育和压力应答等过程中起重要作用。种种研究迹象表明m6A 存在于很多物种中，占到了 RNA甲基化修饰的80%。m6A除了分布在 mRNA 中，也出现在很多非编码 RNA中 ，如：环状RNA 、LncRNA等。Nature正刊发表文章，证实发生m6A RNA甲基化修饰可以调控mRNA稳定性。而随后Cell Research也发表文章，证实环状RNA也会被m6A甲基化修饰，并会促进环状RNA编码蛋白这一有趣的结论。

   云序生物(m6A)RNA甲基化测序流程

云序生物RNA甲基化测序产品

云序优势

一站式服务：

客户只需提供细胞、组织或RNA，云序生物为您完成从MeRIP富集，文库制备，上机测序到数据分析整套服务流程。

优化的实验流程：

MeRIP的富集效率是决定数据质量的关键，云序生物MeRIP实验采用预验证的商业化抗体和精心优化的实验流程，具有极高的效率和特异性。

严格的质控：

云序生物对MeRIP实验的各个关键步骤进行严格的质控，全程监控实验质量，确保客户得到优zhi的数据。

专业的生物信息学分析：

云序生物具有强大的生物信息学团队，能够满足客户的各类深入数据分析需求。

特异性高：

通过抗体特异性富集发生甲基化修饰的RNA片段，以较低的成本实现转录组范围的RNA甲基化研究。

样本要求：

样品类型：

细胞、组织或RNA，其他样本类型请电询。

样品量：

 

a) 细胞：2×10⁷ 

b) 组织：100 mg-1 g

c) RNA：30-300 μg（OD260/280：1.6-2.3；RNA无明显降解28S:18S>1.5或RIN>7）

 

 

样品运输及保存：

样品运输：样品置于1.5mL离心管中，封口膜封好，干冰运输。

样品保存：细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理，液氮冻存后-80℃保存;RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中，-80℃保存，避免反复冻融。

数据分析（下列有※表示个性化分析）

1. 识别甲基化富集峰※

通过高通量测序和生物信息分析，识别(p <10^-5)甲基化富集的基因组区域。

注：每个样品组做一个Input，以去除基因组背景，降低假阳性率

2. RNA甲基富集峰注释※

通过生物信息分析利用邻近基因对富集峰进行注释，并根据峰中点相对于已知基因的位置，将富集峰为启动子峰、上游峰、内含子峰、外显子峰、基因间峰。

             

 

3. RNA甲基化富集峰区域的在基因组中的分布※

根据注释信息，绘制富集峰在不同基因组特征上的比例图。

                    

 

4. RNA甲基化位点Motif分析

RNA上甲基化的位点，可能包含某种序列motif。RNA甲基化酶可能正是通过识别这些motif特异性进行甲基化修饰，从而完成转录后调控功能。我们成功识别了全基因组的RNA上的甲基化位点后，获取序列就能使用生物信息学的手段来搜索这些motif，从而揭示RNA甲基化修饰的机制。

5. 差异RNA甲基化区域的识别与聚类※

云序生物使用 diffReps 软件进行差异甲基化位点的识别。默认筛选标准为 FDR<=0.05，具体以报告为准。 识别样本间的差异甲基化区，发现与特定表型或疾病相关的甲基化区域。

6. 差异甲基化区的GO与信号通路分析

对差异甲基化基因进行功能分类，并发现明显富集的功能条目。

 

7. Reads 的分布※

使用 ngs.plot 工具可以展示匹配 reads 在 TSS， genebody， TES 等位点的分布情况，可以用来观察 RNA 甲基化对TSS 等位点是否有偏好。