如何做好RNA电泳实验

RNA与DNA不同，是单链结构，本身就不稳定，再加上它的天敌——RNA酶（RNase）广泛存在于自然界中，又非常稳定，用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能使RNase完全失活。因此，RNA非常容易降解，在提取中必须做好相应的保护措施。而在提取之后，为了确认RNA提取是否成功，一般我们都会进行电泳观察，这时候同样需要注意，如果操作不当，那么得到的电泳图可能就会不尽如人意。下面就给大家介绍一些RNA电泳常见的情况。

看了这么多RNA电泳图，那么如何来做好RNA电泳呢？经典的RNA电泳用的是甲醛琼脂糖凝胶电泳，利用甲醛与谷氨酸残基的单亚氨基基团形成不稳定的碱基配对，这些配对通过阻止链内碱基配对而使RNA维持在变性状态，不会被RNase降解。但是近些年报导的甲醛中毒事件令人谈“醛”色变，在2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中，甲醛更是被列入了一类致癌物中。因此很多人不愿意使用甲醛琼脂糖凝胶电泳。

那么不使用甲醛琼脂糖凝胶电泳方法，如何做好RNA电泳呢？今天小新就将实验室用的RNA电泳方法分享给大家作参考。

1. 将电泳槽、制胶槽、梳子等用0.1%的DEPC水37℃浸泡过夜，然后用RNase-free的水冲洗干净；

2. 用RNase-free的水配置1×TAE，制胶和电泳液也要使用RNase-free的水配置的1×TAE：

3. 向电泳液中加入0.05%的蛋白酶K贮存液（Simgen Cat.No.8000224），混合均匀，静置过夜（16~24小时，由于蛋白酶K最适活性在60℃左右，夏天可适当缩短，冬天可适当延长），第二天即可进行RNA电泳。

解释：RNase不管如何稳定，本质还是蛋白质，而蛋白酶K就是专门分解蛋白质的，用上述方法进行RNA电泳，既能保证RNA在电泳过程中不会被降解，又无毒无害，能够放心使用。希望这个方法对各位读者有所帮助，能够做好RNA电泳实验。