HPLC方法开发之案例分享
案例分析1-OOT
实验现象：稳定性研究数据回顾分析中发现片剂含量测定检测结果差异较大，多个时间点的检测结果的极差超过6%。
原因调查：经过调查发现按照质量标准的规定（取本品20片研细后取细粉适量）存在粉末含量不均一的情况。
解决发案：将供试品处理方式由“研细”改为“取本品10片置1L量瓶中”。
案例分析2-研钵吸附
实验现象：多批次检测结果含量测定检测结果低于含量均匀度约3%。
原因调查：本品为片剂，含量测定样品处理方法为“取20片”研细，研细过程中研钵证明有吸附。
解决发案：将供试品处理方式由“研细”改为“取本品10片置1L量瓶中”。
案例分析3-供试品溶解性
实验现象：半年后起始物料方法验证时供试品在规定的稀释剂中不能溶解。
原因分析：可能是贮存期间晶型发生变化。
解决发案：改变稀释剂，重新进行方法开发与验证
案例分析4-酮式烯醇式互变
色谱条件与系统适用性实验：用十八烷基硅烷键合硅胶纬填充剂；以0.02mol/L磷酸二氢钾溶液（取磷酸二氢钾2.72g，加水800ml使溶解，用1mol/L氢氧化钾溶液调节PH值5.0，用水稀释至1000ml，混匀）-甲醇（92:8）流动相；检测波长为230mn。
来自《中国药典》2015年版P288
案例分析5-不同ph溶出介质
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶纬填充剂；以谁（用磷酸调节PH值至3.0）为流动相A.
溶出介质：水，0.1M盐酸溶液，PH4.5醋酸盐缓冲液，PH6.8磷酸盐缓冲液。
试验现象：活性成分为碱性有机物，在ph6.8磷酸盐缓冲液的溶出曲线检测中发现峰分叉，其中三种介质峰形正常
解决发案：将流动相A改为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节PH值至3.0）
案例分析6-溶出介质中有SDS
色谱条件：用辛烷基硅烷键合硅胶纬填充剂；以磷酸盐缓冲液（PH3.0）为流动相A
溶出介质：PH6.8磷酸盐缓冲液+1%SDS
试验现象：活性成分为碱性有机物，峰分叉
解决发案：为流动相A中加入1%高氯酸钠
案例分析7-三氟乙酸残留
方法开发难点：三氟乙酸有强离子化倾向，在反相色谱中保留相对其他组分弱的多，如果采用梯度洗脱，上下限跨度太大，运行时间过长；紫外检测器中响应弱，供试品浓度可能需要达到10mg/ml，供试品参与溶剂效应的形成
解决方案：SAX柱，HILLIC柱，在流动相中加入烷基胺，稀释剂中加入氯化钠，采用质谱检测器
案例分析8-降解试验
实验现象：含量测定方法验证中酸降解（0.1mol/L盐酸）样品溶液主峰分叉，盐酸用等量氢氧化钠中和，其他组成同方法规定的稀释剂
原因分析：主成分为碱性化合物，稀释剂中氯离子与主成分形成离子缔和物
解决发案：将酸改为三氟乙酸，同流动相中加添加剂
案例分析9-强保留组分
实验现象：某胶囊溶出曲线检测，C18柱，缓冲盐-乙腈流动相，多次进样后主峰分叉
原因分析：初步判断有强保留组分污染色谱柱，重新处理色谱柱峰形正常，再多次进样后峰再次分叉
解决发案：改色谱柱为CN柱
案例分析10-有机相选择性
实验现象：某个基因毒杂质检测方法开发期间发现有机相甲醇与乙腈待测物峰均有不同杂质难以分离。
解决发案：将有机相调整为甲醇-乙腈（1:1）
案例分析11-灵敏度
实验现象：方法开发期间发现限度浓度对照品溶液的信燥比30附近，方法验证时定量限为限度的50%，信燥比为15左右
解决发案：在系统适用性中规定，对照品溶液的信燥比应不得低于20
案例分析12-方法转移失败
实验现象：方法转移时发现有二个杂质峰无法分离
原因分析：研发实验室开发方法用的液相色谱仪为岛津的高压二元泵，而QC实验室主要为低压四元泵
解决发案：重新进行方法开发与转移
咨询
我们尊重知识产权，如您认为本平台所载文章、图片、视频等内容侵犯您的合法权益，请您及时联系我们，我们将依据相关法律法规、平台规则予以处理。
关键字
- 216
- 点赞
- 复制链接
- 举报
