胶体金标记效率提升常见问题及其解决方案

1.胶体金免疫层析中灵敏度和假阳的界定

答：灵敏度是指具有适当的可信限度，可以区分最小的浓度改变或变化，即可以让胶体金试纸条显色的待测物的最小浓度或量；假阳是指实际阴性样本检测时出现阳性的结果，一般都是由非特异性结合引起的。

胶体金试纸条开发过程中应对灵敏度和假阳进行确定：检测尽可能多的系列空白样本，试纸条均应不出线则符合产品对假阳的要求；将一定浓度的抗原或样本进行梯度稀释，每个梯度的抗原或样本稀释液重复3-5份，每份稀释液重复检测不少于20次，将具有95%阳性检出率的抗原或样本浓度水平作为灵敏度。

当检测样本时，无法判定检测结果是灵敏度附近浓度还是假阳结果时，一般会对样本采取消除非特异性结合的措施进行处理后重新检测，若显色消失则初次检验结果为假阳性结果，若仍然显色则为真实检验结果。

2.不同的病原抗体标记的PH值差异挺大的，怎么做多重的病原抗体标记?

答：多重病原抗体同时标记存在标记效率偏度，标记批间差大等问题，因此建议单个病原抗体进行标记，标记完成后按照一定的比例混合均匀后再喷球。

3.免疫荧光试剂研发过程中结合垫和NC膜接缝处经常有荧光微球残留，如何解决这个问题? 如何避免抗体偶联过程中封闭后微球聚集这问题?

答：接缝处经常有荧光微球残留主要原因是荧光微球聚集，微球聚集在活化、偶联、封闭以及喷球干燥过程中均会发生，另外样本中的某些物质也会引起微球聚沉。防止微球聚集的方法有很多：工作体系中添加适量的表面化活性剂、适当控制活化剂的量以及活化时间、控制偶联时抗体的浓度、选用合适的封闭剂以及封闭剂量、适当超声、调整合适的工作液配方，样本进行前处理等。

4.膜面层析过程中出现星星点点的现象，胶体金的颜色，整个膜面都有，不是线条的位置。请问是什么原因

答：初步判断有两方面的原因：一个使用的NC膜引起的，膜的质量以及疏水性都会影响胶体金在膜表面的层析；另一个原因就是胶体金工作液中表面活性剂选用不当或量比较少，导致胶体金不能顺利层析从而滞留在膜的表面。

5.上样缓冲液中，缓冲液成分对灵敏度的影响以及pH的选择。偏中性还是弱碱性?

答：缓冲液中的成分会对灵敏度有一定的影响，比如盐离子浓度高低、表面活性剂的含量多少等；具体怎么影响需要看所使用缓冲液的成分来判断。

缓冲液pH的选择主要取决于待测物以及带测样本的属性，需要保证使用缓冲液后不仅不会影响待测物与试纸条的反应，反而应该为待测物与试纸条提供一个良好的反应环境，以保证检测结果的准确性。