胶体金标记效率提升
一、胶体金的制备
- 纳米金是粒径为纳米级别的金(Au)球体的胶体聚合物。
- 不同粒径的纳米金胶体宏观表征为不同颜色的液体,不同粒径适配不同的检测项目。
- 传统的制备方法已有100多年的历史,主要有白磷还原法(3- 12nm)、抗坏血酸还原法(6- 13nm)、柠檬酸三钠还原法( 5- 60nm)等方法。
- 免疫诊断主要应用大粒径的纳米金。柠檬酸三钠法广泛应用。
单分散胶体金
- 柠檬酸三钠法制备的纳米金规则度和粒径均匀度较差 (50%),易凝结,且无法长期稳定保存(3-6个月)。
- 理想的纳米金大小基本相等,均匀一致,无椭圆形及多 角形的纳米金存在,又被称为单分散纳米金。
- 实际应用中仅在使用单分散纳米金时抗原抗体的结合效 率最高,且材料使用最为节省。
- 单分散胶体金用途广泛,可用于电镜、侧向层析及流式等领域。
- 胶体金的质量对于下游应用至关重要,是确保下游产品性能稳定、均一的关键因素。
胶体金标记蛋白主要是三种方式在起作用:疏水作用力、静电引力和金-硫键 布朗运动--机会 常规胶体金标记,经试验测算会有30%左右的抗体未标记到胶体金表面
二、超高浓度胶体金
超高浓度胶体金质控
三、推荐标记流程
为什么能提高标记效率?
微观上:
- 标记过程pH可视化,全程精准监控,更换批次后,同一粒径的金可直接用相同的pH进行微调即可,以逸待劳。 标记体积更小,分子布朗运动碰撞概率增加,标记效率提升。
- 常规胶体金的标记,反应完成后离心,上清中约有30%以上的游离抗体被浪费。使用超高浓度胶体金,更省材料。
- 胶体金粒径均一,离心过程颗粒聚集,死金减少,减少调试的工作量,节省人工
- 标记浓度高,反应体积小,产出量高,省人工、省能源
宏观上:
- 粒径均一,胶体金颜色无批间差,成品批间差小。
- 扩增产能,无需大设备投入。
- 标记过程仅需1~2人即可,减少过程操作人员,减少质量控制。
常见问题及解决方案
序号 |
常见问题 |
常见解决方案 |
1 |
出假阳 |
1、更换为更均一的胶体金; 2、标记完成后,低速离心去除大颗粒(离心过多,灵敏度减弱;离心不足,假阳性消除不了) 3、更换封闭蛋白(如Casein,可以在一定程度上消除假阳) 4、改为粒径更小的胶体金。 |
2 |
加入封闭液就出现死金的情况 |
封闭液中有高盐或者重金属(如BSA的生产过程有些厂家没有进行脱盐处理),建议更换封闭蛋白 |
3 |
离心死金 |
1、标记条件不合适,抗体没有足够的保护能力 2、更改离心条件,降低离心力或者减少离心时间 |
4 |
喷涂金垫后死金 |
1、更换金垫,有些金垫自身含有一些配方,胶体金的适配性不佳 2、金标记复溶液中配方有缺陷,如糖含量不足,造成干燥过程不保水而“死金” 3、金复溶液中添加一些大分子物质,如PVP·K30增加溶液的分散性,进一步防止金的聚集。 |
5 |
标记不上 |
1、更换粒径更小的胶体金 2、抗体保存液中的盐含量过高,可以透析除盐之后再标记 3、盐破坏试验不能作为唯一标准,有些已经标记上的抗体,在盐破坏反应试验中,表现不佳。可以通过跑条带,观察C线的结合情况,判断是否标记上去 4、采用生物素-亲和素的工艺 |
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