人间充质干细胞的复苏
1.准备好37°C水浴；
2.超净台中，取5mL人间充质干细胞无血清完全培养基于T25瓶中（可根据实际复苏的细胞量选择培养容器与培养基体积），并将培养瓶置于37°C，5% CO2培养箱中孵育30min；
3.超净台中，取10mL人间充质干细胞完全培养基于15mL离心管中，待用；
注意：无需将人间充质干细胞无血清完全培养基预先水浴至37°C，以免影响培养基中生长因子的活性。
4.从液氮中取出冻存的人间充质干细胞，迅速将冻存管置于37°C温水中，并快速晃动冻存管，使其内含物尽快融化，待冻存管内含物融化完全后取出；
注意：
1）尽可能将冻存管的内含物全部浸没于37°C温水中，使内含物均匀融化；
2) 请勿使温水没过冻存管盖的螺口以防污染;
3) 细胞复苏的操作过程要迅速，避免影响细胞复苏后的活性。
5.在将冻存管拿进超净台之前，用75%酒精对其表面进行消毒；
6.轻轻重悬细胞，并将其移入待用的装有10mL人间充质干细胞完全培养基的15mL离心管里；
7.用1mL培养基再次冲洗冻存管，并将此悬液移至离心管中，轻轻吹打混匀；
8.室温下，300g离心10min；
9.倾去上清，往沉淀加入2-3mL的人间充质干细胞完全培养基，轻轻吸打均匀；
10.从细胞培养箱中取出已预先孵育30min的T25瓶，吸去培养瓶中的液体；
11.将细胞按0.8-1.0×104个活细胞/cm2的密度接种到T25瓶中，并加入足量的人间充质干细胞无血清完全培养基，轻轻摇晃培养瓶，使细胞分布均匀；
12.将细胞置于37°C，5% CO2的细胞培养箱中培养；
13.第二天，更换新鲜的人间充质干细胞无血清完全培养基；
14.每隔两天更换一次新鲜的培养基，直至细胞生长至80-90%的汇合度。
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