AccelerRT® 5G Template Switching Enzyme
- YJ-05
- 易锦生物
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- 2023-04-28 11:28:54
广州易锦生物技术有限公司
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AccelerRT® 5G逆转录酶 (RNase H-)是基于M-MuLV-RT酶通过试管进化(in vitro evolution)而产生的一种新型逆转录酶,该酶具RNA和DNA依赖性的聚合酶活性,而不具有RNase H活性。具有高效模板转换功能,可用于全长cDNA合成。与野生型M-MuLV RT相比,该工程化酶具有更显著的热稳定性、合成持续性以及合成效率。
产品特征
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不具有RNase H活性
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具有高效模板转换功能
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热稳定:反应混合物在37-55℃孵育60分钟后,>90%活性
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高灵敏度:较宽的cDNA合成起始总RNA范围(10 pg–5µg)
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反应速度快:在15-30分钟内完成cDNA合成
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增加对RT反应抑制剂的抵抗力
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掺入修饰核苷酸
产品性能
模板转换功能展示
图1. Template Switching RT酶模板转换原理介绍。以Oligo(dT) VN Primer为逆转录引物进行第一链cDNA的合成,并且利用逆转录酶的末端脱氧核苷转移酶 (TdT) 活性(Template-switching),当逆转录酶到达RNA模板的5’端时,TdT活性在cDNA 3’端加上几个不依赖于模版的C碱基。在模板转换步骤,使用Template-switching oligo模板转换引物合成cDNA的第二链,最后,用反向基因特异性引物和正向TSO特异性引物进行PCR扩增以获得全长cDNA产物。
高效TSO接头连接效率
高效TSO接头连接效率
使用TSO引物和AccelerRT® 5G逆转录酶进行逆转录反应后,再用TSO引物5’端部分AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACAT/rG//rG//iXNA_G/与ACTB的R特异引物进行PCR扩增;或用ACTB的特异F引物与特异R引物进行PCR扩增。
图2. 使用TSO引物AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACAT/rG//rG//iXNA_G/进行AccelerRT® 5G模板转换逆转录反应,所得cDNA分别以TSO引物5’端部分或基因特异上游和下游引物分别进行PCR扩增(A)。PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳(B),通过产物浓度密度值及产物长度计算TSO接头连接效率(表)。
具有宽广的温度稳定性
具有宽广的温度稳定性
图3. AccelerRT® 5G逆转录酶具有宽广的温度稳定性。使用AccelerRT® 5G逆转录酶在42~60℃不同温度下,对1ng Hela total RNA进行反转录,随后对不同基因进行qPCR扩增。
灵敏度高
灵敏度高
图4. 使用AccelerRT® 5G逆转录酶,对1pg,10pg,100pg,1ng,10ng,100ng的Hela total RNA进行反转录,随后使用BlazeTaq™ SYBR® Green qPCR mix 2.0(Cat.# QP031)进行qPCR扩增。
高效逆转录效率
高效逆转录效率
图5. 使用AccelerRT® 5G逆转录酶,对1ng的Hela total RNA分别进行10min、15min、30min、60min反转录,随后使用BlazeTaq™ SYBR® Green qPCR mix 2.0(Cat.# QP031)进行qPCR扩增。
高效抗抑制性
高效抗抑制性
图6.使用AccelerRT® 5G逆转录酶,在不同抑制剂条件下对Hela total RNA分别反转录,随后使用BlazeTaq™ SYBR® Green qPCR mix 2.0(Cat.# QP031)进行qPCR扩增。
有效获得9.2 kb长度cDNA
有效获得9.2 kb长度cDNA
图7. 使用AccelerRT® 5G逆转录酶对Hela total RNA进行反转录,然后使用UltraHiPF™ DNA Polymerase Kit(Cat.# PC018)进行PCR扩增。
发现融合基因
发现融合基因
图8. 使用AccelerRT® 5G逆转录酶对H2228 total RNA进行反转录,然后使用UltraHiPF™ DNA Polymerase Kit(Cat.# PC018),所得cDNA分别以TSO引物5’端部分和ALK基因特异反向引物进行半巣氏PCR扩增,得到EML4-ALK(E6;A20)融合类型片段约1.2kb(A);将图A扩增产物用 EML4 正向引物与ALK反向引物进行扩增验证,得到片段800bp左右(B)。