质谱级赖氨酰肽链内切酶

Lysyl Endopeptidase^®

 

 

　　本产品是质谱分析前处理时常用的蛋白分解酶即赖氨酰肽链内切酶，该酶可以特异性切除赖氨酸基团C末端的多肽，可用于蛋白测序分析和 Lys-X 化合物的酶合成。若同时使用赖氨酰肽链内切酶和胰酶，可更好地切断赖氨酸基团的多肽，增加多肽的数量。产品已按照使用习惯做成小包装，是方便使用的冷冻干燥品。20 μg/支可用于100-200个样品的凝胶内消化。

 

来源：细菌

外观：冻干粉（包含２ mmol/L Tris-HCl 缓冲液，pH８）

活性：0.03～0.07 AU/vial

分子量：27,000（琼脂糖过滤），30,000（SDS-PAGE）

溶解性：溶于水或缓冲液

稳定性：溶解于 pH 值 5.0-12.0 的 Tris 缓冲液中，可在４℃稳定保存２年；在 pH 值 6.0-11.0、30℃时能稳定保存，但温度超过50℃时不稳定。

最适pH值：9.0~9.5

等电点：6.9~7.0 

底物特异性：

可水解底物——Tos-Lys-OMe、Bz-Lys-NH₂、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA

不可水解底物——Bz-Arg-NH₂、Bz-Arg-pNA、Arg-pNA

抑制剂：DFP、PMSF、TLCK

 

 

◆特点

 

●  高特异性、高蛋白质消化率、适用于蛋白质谱分析

●  提高裂解效率、增加肽段数量

●  根据使用量特意制备小包装，方便使用

◆应用

 

　　分别采用胰蛋白酶（Tp）、赖氨酰肽链内切酶（Lys-C）和 Tp与Lys-C 联用进行胶内酶切的效果比较。

　　牛血清蛋白 BSA 的条带（100 ng）通过 SDS-PAGE 获得，然后分别用 Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 进行酶切，再用 MALDI-TOFMS 法进行分析。

　　这些蛋白酶的实验效果见下表。

 

表 1：Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 的结果对照

这些结果表明 Lys-C 酶解的漏切位点数（Missed Cleavage）最少。Tp 酶解时加入 Lys-C 后，漏切位点数有所降低，同时，可以鉴定出更多的多肽。

 

	Tp	Lys-C	Lys-C+Tp
裂解位点	精氨酸和赖氨酸的Ｃ端	赖氨酸的Ｃ端	精氨酸和赖氨酸的Ｃ端
漏切位点数 （漏切位点所占比例）	多（８%）	很少（０%）	少（３%）
鉴定出的多肽数量	１７	１９	２２

 

 

胰蛋白酶（Tp）（图 ａ）和赖氨酰肽链内切酶（Lys-C）+Tp（ 图 ｂ）酶切后的质谱结果对照图。

Lys-C+Tp 酶切后，可以在 m/z=2000 时得到吸收峰，而单独的 Tp 酶切在 m/z=2000 时没有吸收峰。该结果表明 Lys-C 可以提高测序覆盖度。

 

( 数据由大阪医疗中心和妇婴健康研究所Ｙ. Wada 博士提供 )

 

 

赖氨酰肽链内切酶

 

　　赖氨酰肽链内切酶，最初由 Masaki 等人从土壤细菌中分离得到。该酶可以特异性剪切赖氨酸残基Ｃ末端和Ｓ-氨乙基半胱氨酸残基的肽键，用于蛋白测序和 Lys-X 化合物的酶催化合成。该酶稳定性高，在４Ｍ尿素或 0.1% SDS 溶液中 30℃ 孵育６小时之后，仍然拥有完整的生物活性。

 

外观	冻干粉（包含ca. 10% Tris-HCl buffer，pH 8）	活性	见包装
分子量	27,000（凝胶过滤）；30,000 (SDS-PAGE)	溶解性	易溶于水或缓冲液
最佳pH	9.0-9.5（酰胺酶的最佳活性 pH）	等电点	6.9-7.0
抑制剂	DFP、PMSF、TLCK	来源	细菌
稳定性	溶于pH 值 5.0-12.0 的缓冲液中，可于４℃稳定保存。溶于pH 值 6.0-11.0 的缓冲液中，可于30℃稳 　定保存，但是50℃及以上不稳定。
单位定义	一单位酰胺酶（AU）指在30℃ pH 9.5 时每分钟产生１ μmol 对硝基苯胺所需的酶量。
底物特异性	水解底物：Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA
	非水解底物：Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA

 

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。

◆产品列表

 

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级
125-05061	Lysyl Endopeptidase®, MS Grade  赖氨酰肽链内切酶，MS级	20 μg×5	质谱级
121-05063		20 μg
050-05941	Endoproteinaseglu C, Sequencinggrade  测序级谷氨酰蛋白内切酶Glu-C	50 μg	生物化学分析级
202-15951	Trypsin, from Porcine Pancreas, Mass Spectrometrygrade  猪胰腺胰蛋白酶质谱级别	20 μg×5	质谱级