双荧光素酶载体构建-载体选择
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- 2022-12-14 16:05:00
北京欧林格生物科技有限公司
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常用的双荧光素酶的表达质粒psicheck2/pmirGLO，这两个都是promega公司出品的
1） 这两个载体的元件大致相同，对于miRNA和靶基因或相关的萤光素酶实验来讲，没什么区别。
2）请注意一点 pmirGLO是Ruc作为内参，psicheck2是以luc作为内参
3）作为双萤光素酶载体，我们遇到过不同来源的质粒，内参的表达量参差不齐。萤光素酶的表达量又非常灵敏，
参照表达不正常是影响下游的结果分析的。所以来源可靠的载体非常重要。有质控的条件的实验室，实验结果才靠谱。
4）萤光素酶的载体构建和别的载体构建没啥区别，miRNA和靶基因的验证实验，我们一般是构建3UTR序列。那么有几种构建方式
a. 构建3UTR全长 ，mut------土豪or自己构建
b. 构建结合位点附近300-500bp的片段------经济实惠的选择方式
c 构建预测到的几十个bp的片段------有文献也这样做，也OK
