ELISA检测
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- 2022-12-14 16:40:23
北京欧林格生物科技有限公司
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技术原理:
酶联免疫吸附试验（又称酵素免疫分析法，Enzyme-linked immunosorbent assay，简称 ELISA）利用抗原抗体之间专一性键结之特性，对检体进行检测；由于结合于固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性，因此设计其键 结机制后，配合酵素呈色反应，即可显示特定抗原或抗体是否存在，并可利用呈色之深浅进行定量分析。根据待测样品与键结机制的不同，ELISA可设计出各种 不同类型的检测方式，主要以三明治法（sandwich）、间接法（indirect）、以及竞争法（Competitive）三种为主，以下为各种方法 之介绍。
三明治法
三明治法常用于检测大分子抗原，一般之操作步骤为:
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将具有专一性之抗体固著（coating）于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体；
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加入待测检体，检体中若含有待测之抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结；
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洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一之一次抗体，与待测抗原进行键结；
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洗去多余未键结一次抗体，加入带有酵素之二次抗体，与一次抗体键结；
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洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果。
三明治法分别以两种抗体对检体中的抗原进行两次专一性辨认，因此专一性相当高，但此待测抗原必须是多价抗原，如此才可获得两种以上的专一性抗体，以分别进行夹心；而且此法需要足够的表位空间以进行抗原抗体的夹心，所以并不适用于半抗原或小分子抗原等分子量较小之标的。
间接法
间接法常用于检测抗体，一般之操作步骤为：
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将已知之抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余之抗原；
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加入待测检体，检体中若含有待测之一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结；
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洗去多余待测检体，加入带有酵素之二次抗体，与待测之一次抗体键结；
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洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含。量。
竞争法
竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为：
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将具有专一性之抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体；
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加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结；
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加入带有酵素之抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酵素之抗原可键。结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来；
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洗去检体与带有酵素之抗原，加入酵素受质使酵素呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酵素的抗原越少，显色也就越浅；
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当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。
结果判断
定性测定
定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出”有”或”无”的简单回答，分别用”阳性”、”阴性”表示。” 阳性”表示该标本在该测定系统中有反应。”阴性”则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果，即用滴度来表示反应的强度，其实质仍是一个定性试验。在这 种半定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的最高稀释度即为滴度。根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱，这比观察不稀释标本呈色的 深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。
定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出”有”或”无”的简单回答，分别用”阳性”、”阴性”表示。” 阳性”表示该标本在该测定系统中有反应。”阴性”则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果，即用滴度来表示反应的强度，其实质仍是一个定性试验。在这 种半定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的最高稀释度即为滴度。根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱，这比观察不稀释标本呈色的 深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。
在间接法和夹心法ELSIA中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。
定量测定
ELSIA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考 标准品在相同的条件下制作标准曲线。测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线最高点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数 纸，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，中央较呈直线的部分是最理想的检测 区域。
测定小分子量物质常用竞争法，其标准曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。标准曲线的形状因试剂盒所用模式的差别而略有不同。ELISA测定的标准曲线注意图中横坐标为对数关系，这更有利于测定系统的表达。
服务内容
您需要提供以下材料：
细胞上清和血清等，试剂盒(可代购)。
您将获得以下结果：
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（1）实验数据；
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（2）数据分析；
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（3）实验报告。
