I 简介

肝星形细胞占肝脏细胞的比例相对较低，呈梭形或多边形，胞浆内有多个富含维生素A的脂滴。在正常肝脏中，星状细胞处于静止状态，表达marker基因Desmin，增殖活性低。依靠本公司在原代肝脏细胞分离与纯化上的技术优势，小鼠原代肝星形细胞分离至SPF级小鼠，来源清晰、细胞活力高、细胞纯度高（>85%），性价比高，可广泛应用于基础生命科学研究以及药物研发中。公司可个性化定制原代细胞，可分离不同品系、不同药物处理（如CCl₄）的细胞，满足不同客户的需求。

II  试剂与材料

-冻存小鼠原代肝星形细胞（Cat# LV-MHSC001）        

-复苏培养基（Cat#LV-Rec001）

-星形细胞培养基（Cat# LV-MHSCM001）

-碎冰及冰盒

-无菌15ml离心管（冰上预冷）                       

-一次性移液管

-宽口移液枪头（普通移液枪头剪去尖头，再灭菌使用）

-移液枪

-恒温水浴锅（38℃预热）                          

-生物安全柜   

-37^oC/5%CO₂培养箱

-冷冻水平离心机（带水平转子，可离心15ml离心管）

-75%酒精

III 细胞的复苏与铺板

将15ml离心管插入盛有足量碎冰的冰盒中，紫外消毒15min；预冷离心机；复苏培养基放碎冰中充分预冷；铺板培养基放入38℃恒温水浴锅中充分预热。

将冻存的细胞从冷藏位置迅速转移至38℃恒温水浴锅中，尽可能多的浸入38℃水中，顺时针水平摇动，但必须确保冻存管管盖保持在水面以上。

解冻冻存管约90-120s，至冻存管中只有少量碎冰漂浮即可。

用75%酒精消毒冻存管，并将其转移到生物安全柜。

用宽口枪头将细胞重悬（轻轻吹打2次），并转移至预冷的15ml离心管中（注意：冻存管与枪头上残留细胞，可用1ml

复苏培养基清洗冻存管与枪头）。

向细胞悬液逐滴加入预冷复苏培养基，每1ml细胞悬液加入10ml复苏培养基（注意：前3ml要缓慢逐滴加入并轻微摇晃，后面7ml可加快速度），最后轻微上下颠倒1次混匀。

600×g，4℃离心5min，去上清并用铺板培养基重悬。

沉淀的细胞用肝星形细胞培养基重悬并定容至4ml，用台盼蓝排除法测定肝星形细胞的活力和细胞总量。

将细胞以2×10⁴cells/cm²的密度接种至培养皿中，摇匀，在37℃/5%CO₂培养箱中培养，24h后换液，后3隔天换液。

IV 肝星形细胞培养与传代

• 通常情况下，我司不建议客户对细胞进行传代，因为传代细胞可能会丢失部分细胞特性。
• 如进行传代，在本培养体系中，细胞在铺板培养后第3~4天可传代，细胞可检测到肝星形细胞标记基因Desmin及a-SMA的表达。客户可根据实验需求加以考虑。
• 肝星形细胞可制备成永生化细胞，满足部分基础实验研究。