I 简介

原代肝细胞相较于肝癌细胞系或者永生化肝细胞系，具有高度分化、生理功能齐全、最接近于机体内肝细胞状态的特点，是生命科学及药物相关研究的“金标准”。小鼠原代肝细胞分离自SPF级小鼠（Mus musculus），经过我司成熟的两步胶原酶灌注法，可得到高活力肝细胞。本公司只对粤港澳大湾区的科研院所和生物医药企业提供新鲜分离的小鼠原代肝细胞，用于基础生命科学研究、新药研发等领域。

II  试剂与材料

-新鲜分离小鼠原代肝细胞（Cat# LV-PMH002）      

-铺板培养基（Cat#LV-WEP006）

-维持培养基（Cat#LV-WEM006）                   

-胶原包被的细胞培养板（Cat#LV-Coated）     

-75%酒精

-无菌15ml离心管                                

-一次性移液管

-宽口移液枪头（普通枪头剪去尖头，再灭菌使用）

-移液枪

-冷冻水平离心机（带水平转子，可离心15ml离心管）                    

-生物安全柜

-37^oC/5%CO₂培养箱

III 细胞转运

• 细胞进过胶原酶灌注法分离得到小鼠肝细胞悬液。
• 通过台盼蓝细胞计数，确定细胞活力、活细胞数、形态是否达到发货要求。
• 50×g，4℃离心5min，去上清，用我司的高效细胞保存液重悬细胞（15ml离心管中），在0~4℃条件下转运到您的实验室。

IV 收到细胞后的处理

• 收到细胞后，在细胞房内去掉自封袋，用75%酒精消毒管身。
• 50×g，常温离心5min，转移至生物安全柜中，去上清，利用铺板培养基重悬细胞。
• 用台盼蓝排除法测定肝细胞的活力和细胞总量，建议检测3

次，求取平均值。

• 按活细胞数1×10⁵cells/cm²接种到胶原包被培养板中，摇匀，在37℃/5%CO₂培养箱中培养。（理论上，铺板4h后细胞融合度可达80%以上。）

V 肝细胞消化再铺板

• 培养4h，细胞已经贴壁，移除铺板培养基（含部分死细胞），加入维持培养基，每2天更换液1次。
• 小鼠原代肝细胞具有有限的增殖能力，具有明显的接触抑制特性，且肝细胞的分化特性以及培养时间依赖于高密度的细胞培养。
• 小鼠原代肝细胞体外维持时间相对较短，建议实验在铺板后3天内完成，不建议对小鼠肝细胞进行传代培养。