荧光定量PCR
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- 2022-07-18 11:18:21
上海闪晶分子生物科技有限公司
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荧光定量PCR应用广泛
• 可以对各种基因的表达进行定量分析,如:同一基因在不同组织中的表达差异、同一基因在不同药物处理后的表达差异、转基因食品的检测。过去最常用的高通量筛选基因表达差异的技术是 cDNA 芯片和差异显示,但这两种技术的缺点是只能定性而非完整意义上的定量分析。实时 PCR 技术和高通道实时 PCR 仪的出现,无疑为这种检测提供了极大的方便。
• 可以进行点突变分析和等位基因分析,用不同的荧光报告基团标记 Taqman 探针,然后分别与野生型和突变型杂交,如果一种荧光信号明显强于另一种荧光信号,则表明它是纯合子;如果两种荧光信号都明显增强,则表明它是杂合子。另外分子信标( Molecular Beacon)就是专门为这种技术设计的探针。
• 可以进行单核苷酸多态性的分析,检测单核苷酸多态性对于研究个体对不同疾病的易感性或者个体对特定药物的不同反应有着重要的意义,因分子信标结构的巧妙性,一旦 SNP 的序列信息是已知的,采用这种技术进行高通量的 SNP 检测将会变得简单而准确。
• 可以进行 DNA 甲基化检测, DNA 甲基化同人类的许多疾病有关,特别是癌症, Laird 报道了一种称作 Methylight 的技术,在扩增之前先处理 DNA ,使得未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不受影响,用特异性的引物和 Taqman 探针来区分甲基化和非甲基化的 DNA ,这种方法不仅方便而且灵敏度更高。
• 对传染性疾病进行定量定性分析,这在我国应用比较广泛,大家比较熟悉。许多生产临床PCR 试剂的厂商已经陆续推出了一系列的诊断试剂,如:肝炎系列、性病系列、肿瘤系列等等。
• 闪晶生物同时提供药物伴随诊断(companion diagnostic)方法如EGFR、BRAF V600E突变、HER2 扩增、BCR-Abl、PML-RAR、ALK融合基因、Sry基因检测等。
荧光定量PCR技术服务 (含lncRNA荧光定量PCR-环状RNA荧光定量PCR)
荧光定量PCR用Taqman方法对DNA/RNA进行real time PCR的定量测定或型的鉴定。
荧光定量PCR服务要求
1. 请您提供新鲜的且尽量多的材料(各种材料的RNA提取量请参照“总RNA 的提取”),或直接提供纯化好的总RNA(大于 5 ug/ 样品);(各种材料的DNA提取量请参照“ DNA的提取”),或直接提供纯化好的DNA(大于 5 ug/ 样品)。
2. 请通过E-mail提供已知的全长基因序列。
3. 请提供尽可能详细的背景资料:DNA/ RNA来源、丰度等
荧光定量PCR操作程序
1. 根据基因序列设计特异性的引物和荧光探针。
2. 提取DNA/RNA 。
3. Real Time PCR(荧光定量PCR),进行实验结果分析
4. 实验完成后,提供完整的实验报告(含软件分析结果)及引物等实验材料
荧光定量PCR收费标准
1、RNA提取:10-20个样品的RNA提取是:150元/个;20-30个样品的RNA提取是:120 元/个;30个以上样品的RNA提取是:100元/个;每份材料最少应提供:100mg/样品
2、一个指标每个样品为150元;二个指标每个样品为240元;三指标每个样品为300元,三个指标以上每个样品为80元/反应。
3、引物合成为每个碱基2.1元,探针标记为1200元/条,如果是用sybr green I(染料)做,则免去探针的费用,染料赠送。
4、内参的GAPDH引物探针免费,标准曲线免费赠送。
5、不再收取任何的基础费或者开机费。
(如果样本或者指标数更多,再面议),5000.00元以内的服务费,一律100%预付;
时间:接到样品后1个月内完成!
提供样本:用干冰运输,样品重量在100mg左右;上海的用户可以上门取标本。
技术部免费设计引物探针,客户只需提供标本和genebank的ID号或者告诉我们指标的名称。
以下是使用闪晶公司荧光定量PCR技术服务发表文章的部分列表:
1.刘宁宁,周宁,王炎,刘宣,周利红,吴琼,孙珏,范忠泽,李琦 健脾解毒方通过抑制环氧化酶2下调幽门螺杆菌诱导的人胃癌细胞血管内皮生长因子表达,中西医结合学报: Volume 8 October, 2010 Number 10
2.蒯筱漪, 李正阳, 张红杰,线粒体解偶联蛋白2在结肠癌中的表达及其临床意义,ISSN 1009-3079 CN 14-1260/R 世界华人消化杂志 2010年7月28日;18(21): 2202-2208
3.高东,王云月,何霞红,李成云,朱有勇,,TaqMan 荧光定量RT-PCR检测水稻RAcl基因mRNA方法的建立,云南植物研究所 2009 ,31(1):75~81
4.赵杨, 韩凤珍, 刘益芬, 陈敦金,正常妊娠和子痫前期胎盘Syncytin 表达差异探讨,中山大学学报(医学科学版)》> 2009年4月30卷2期
5.岳志芹 刘荭 梁成珠 高宏伟 徐彪 邓明俊 江育林,实时定量RT-PCR检测鱼类传染性造血器官坏死病毒方法的建立与应用,水生生物报 2008年1月第32卷第1期
6.黄 强, 任雪峰, 刘臣海, 齐 伟,MUC5AC特异性siRNA对胆管癌细胞株HCCC-9810增殖及凋亡的影响,世界华人消化杂志 2009年2月28日;17(6): 566-572
7. 陈津津,蔡威,实时荧光定量PCR方法检测幼兔粪便双歧杆菌的实验研究,世界华人消化杂志 2006年5月18日:14(14):1367-1371
8.凌扬,刘永萍,王凤君,孔颖泽,张亚平,胃癌患者外周血癌胚抗原mRNA表达及其临床意义分析,中国肿瘤临床 2008年第35卷第16期
9.熊欣,郑长黎,MiRNA-214对胃癌细胞BGC823,MKN45的细胞周期与凋亡的影响, 中国普通外科杂志 第19卷第12期
10.毛丽萍 ,金小云 “,王跃国 ,王惠民,转录因子EBF3在肝癌组织中的表达及意义,临床检验杂志2008年第26第2期
11.刘雪云,刘永,李金凤,岳少杰,申丽,李晨,汉建忠,许建平,冯丹丹,刘惠君,罗自强,中性粒细胞mGluRI的激活促进其与内皮细胞相互黏附,生理学报Acta Physiologica sinica,June25,2010,62(3):219-224
12. 谢 放, 黄 强,FHIT基因转染对胆管癌细胞增殖与侵袭的影响,世界华人消化杂志 2009年11月28日;17(33): 3437-3440
13.林琳,张桦,张慧涛,贾宁,汪悠悠,朱晔,周文英,彭晓,整合素连接激酶在肾小管上皮细胞转分化中的作用,中华临床医师杂志(电子版) 2009年7月,3卷7期
14.Xiao-Yi Kuai, Zheng-Yang Li, Hong-Jie Zhang,Clinical significance of mitochondrial uncoupling protein 2 expression in colon cancer, 世界华人消化杂志 2010年7月28日;18(21): 2202-2208
15. 高 东 何霞红 王云月 李成云 朱有勇,水稻GA20ox-2基因mRNA的TaqMan荧光定量RT-PCR检测,中国水稻科学(ChinJRiceSci),2009,23(3):309~3
16.高宏伟,梁成珠,岳志芹,吴华,使用Eva Green染料的荧光PCR定性检测转基因产品,(自然科学版),2006,37(2):319~324
17.XIONG Xin ZHENG Changli,The effect of miRNA-214 on cell cycle and apopeosis of gastric cancer cell Lines BGC823 and MKN45, Chinese Journal of General surgery.2010.19(12):1311-1315