UNG酶(尿嘧啶DNA糖基化酶)

UNG酶用途

因PCR是一种极敏感的扩增技术，易受污染的影响。小量的外源 DNA 污染可以与目的模板一块被扩增。当前一次扩增产物用来进行新的扩增反应时，会发生共同来源的污染，这称之为残余污染；从其他样品中纯化的 DNA 或克隆的 DNA 也会是污染源。卫生部已经明确规定，凡是用于临床检验的PCR试剂，都应该有 UNG酶技术，以防止污染。

控制污染的方法主要有两种：

1 、在 PCR 实验过程中使用良好的实验步骤和实验环境减少残余污染：使用抗气雾剂移液管的阻止气雾剂进入 eppendorf 管内；为 PCR 样品配制和扩增后分析设计隔离的区域；在准备新反应前更换手套；总是使用不含有模板的阴性对照检测污染；使用预先混合的反应成分，而不是每个反应的每个试剂单独加入。

•  使用尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG酶），这种酶（也称为尿嘧啶 -N- 糖基化酶或UNG酶）移除 DNA 中的尿嘧啶，在PCR反应液配制时，将dUTP和dTTP 按一定的比例混用，使得扩增产物含有脱氧尿嘧啶，这种产物对 UNG 敏感，所有可以在PCR前对新配制的反应用 UNG 处理以破坏残余产物，杜绝污染。

UNG酶特征

•  克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大肠杆菌经诱导表达后，再经三次过柱纯化分离出来的重组蛋白。

•  50ul 体系中，加入0.1U的UNG酶，能够消除 10 7 带有 dUTP 的、大于 6 个碱基的双链DNA 污染。

•  反应条件： 37℃ ，2分钟；反应 buffer: 20mM Tris-HCl(PH:8.0); 1mM EDTA; 1mM DTT;60度以上可以灭活。