作为生物大分子，mRNA可通过体外转录（IVT，in vitro transcription）的方法大规模合成，T7启动子是目前转录效率最高的启动子之一，因此采用T7 RNA聚合酶（T7 RNA Polymerase）进行体外转录可简单快速获得大量的RNA分子。本试剂盒经过系列转录反应体系的优化，通过T7 RNA Polymerase从模板DNA T7启动子下游开始合成与DNA中一条链互补的RNA，操作简便快捷。
本试剂盒一个反应可以转录产生150-200μg的RNA，转录合成的RNA可用于诸如RNA结构与功能研究、RNA酶保护、探针杂交、RNAi、显微注射及体外翻译等多方面的下游应用。

1) 合成单链RNA；
2) 合成高特异性RNA 探针；
3) 合成siRNA 前体；
4) 制作 RNA 剪接反应（RNA splicing）的前体。

-20℃。

1. 质粒模板线性化时，如何选择限制性内切酶？
带有启动子的质粒可以作为转录模板，质粒的线性化和纯度会影响转录的产量及RNA的完整性。环状质粒由于没有有效
的终止，会转录出不同长度的RNA产物，为了得到特定长度的RNA，质粒必须完全线性化，线性化的质粒需确保双链为平末端或5’端为突出结构。因此需要选择可以产生平末端或5’端为突出结构的II类限制性内切酶，并且酶的识别位点为稀有位点。
2. 转录模板的纯度有要求吗？
模板DNA应为RNaseA-Free、高纯度，建议OD260/280为1.8~2.0。
3. 转录模板必须要去除吗？
最好在转录结束后添加DNase I去除模板。
4. 转录产物产量低或转录失败：
建议做一个对照组和一个实验组。若对照组产量低，请联系近岸蛋白质技术支持。若对照组实验产量正常但实验组产量低，可能存在模板本身的质量问题导致产量低，请尝试以下方案解决：
a) 实验模板中有抑制反应的成分，建议重新纯化模板，确定模板定量及其完整性；
b) 实验模板序列问题，建议延长37℃反应时间，加大模板投入量或尝试其他启动子和RNA聚合酶。
5. 短片段转录产物产量低：
转录产物小于0.3kb时，延长反应时间或增加模板量可以提高RNA产量。
6. 产物电泳拖尾现象：
a) 实验操作过程被RNase污染；
b) DNA模板被RNase污染；
建议重新纯化模板DNA，所有实验过程注意RNase污染控制。
7. RNA产物片段大于预期：
质粒模板没有完全线性化或有义链3’端为突出结构，建议重新线性化质粒模板，确保线性化完全及线性化的质粒请确保双链为平末端或5’端为突出结构；
RNA存在未完全变性的二级结构，更换变性胶检测RNA产物 。
8. RNA产物片段小于预期：
a) 模板序列中包括类似于T7 RNA聚合酶的终止序列导致转录提前中止，建议更换RNA聚合酶尝试；
b) 模板中形成高级结构，建议加入SSB蛋白尝试；
c) RNase污染。