考马斯亮蓝G250

产品信息

产品名称	编号	规格
考马斯亮蓝G250	DY40111	10g/25g

 

产品描述

考马斯亮蓝G250(Coomassie Brilliant Blue G250)是考马斯染料家族的成 员之一，属于三苯甲烷类染料。考马斯亮蓝G250的染色原理为：通过与蛋白质内的氨基和羧基基团间的作用力，考马斯亮蓝与蛋白质形成强但非共价键连接的复合物。蛋白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子(如磺酸基)，从而产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色。考马斯亮蓝有G250和R250两种，“G”为  Green ，G250指具有淡绿色调的蓝色染料，“R”为Red ，R250染料泛微红色调。 考马斯亮蓝G250较多的用于溶液体系中蛋白的定量分析，考马斯亮蓝R250更多用 于聚丙烯酰胺凝胶电泳后蛋白质条带的染色。

考马斯亮蓝G250用于Bradford法进行蛋白浓度测定，该方法灵敏度比Lowry  法高，可测定微克级蛋白质含量，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。此法原理是酸化的G250溶液(也就是Bradford试剂)为阳离子、双质子化形式，溶液为红色，最大吸收波长(Amax)为470nm，当与蛋白质稳定结合后，G250变为阳离子、非质子化形式，溶液变为蓝色，Amax为595nm。蓝色形式染料的量与样本中蛋白的量成正比，因此595nm的吸光度可反映蛋白量。此法反应时间短，结合的G250-蛋白质复合物室温下稳定保持1h，反应灵敏度也很高。

考马斯亮蓝G250的用于蛋白质染色时检测灵敏度虽然比R250低，但也可替代 R250。因其在低于pH 2.0时，溶液无色，pH 7.0时溶液呈深蓝黑色；若发生酸化， 溶液呈现透明的棕褐色。当G250与蛋白结合，溶液又回到蓝色，主要因为蛋白分 子溶液偏中性的pH环境。合适条件下，当把胶放在酸化的G250溶液中染色，显示出蓝色的蛋白条带，背景呈浅琥珀色。此种方法条带快速显色，且背景颜色也很浅使得条带看起来很清楚，则不需要做褪色处理。大部分蛋白用G250检测的下限 是0.5µg。虽然灵敏度降低，但是操作快速且方便，比R250染色节省时间约11 h。

保存方式

常温保存。

产品性质

别名：   酸性蓝90，亮蓝，考马斯亮蓝G，康美赛蓝G250，Brilliant Blue G， Acid Blue 90，Coomassie Brilliant Blue G，CBBG

性状：   蓝色至深紫色粉末

CAS：    6104-58-1

分子式：  C47H48N3O7S2Na；

分子量：  854.02

溶解性：  溶于热水(50mg/mL)，微溶于冷水，乙醇(40mg/mL)，甲醇，10%三氯乙酸

纯度：   ≥90%

 

使用方法

凝胶染色方法

1)考马斯亮蓝G250染色液的配制

将0.2g G250溶于100ml水中(需要加热至50°C促进溶解)。冷却后，加入100ml 1M的硫酸。室温放置3h，最长可过夜，然后滤纸除杂。过滤后的溶液，小心加入22.2ml 10M 的KOH，然后加入28.7g 三氯乙酸(TCA)。混匀后室温放置> 3h，再过滤除杂从而获得琥珀般的棕色溶液，不含蓝色沉淀。                               

2)染色只需将胶完全浸在此染色液中，约15 min后条带就会显示出来。几小时后染色条带的亮度和灵敏度会进一步加强。

3)染色液室温约稳定存放2-3周。

 

Bradford法测蛋白浓度测定

1)    染液的配制

将100mg的G250溶解于50mL 95％的乙醇中，加入85％(w/V)的磷酸l00mL，加水定容至1L。

2)    标准曲线的绘制

在7个试管中分别加入含0、10、20、30、40、50、60ug标准蛋白质溶液，用水补足到60ul，加3mL染色液，混匀后室温放置15分钟，至595nm处比色测定。以蛋白质含量为横坐标，A595的值为纵坐标绘制标准曲线。

3)    测定

取未知浓度的样品60ul，同上测定，从标准曲线上查出相应的含量。

该方法反应快、操作简便、消耗样品少，但不同蛋白质间的差异大，标准曲线的线性不好，显色受时间和温度影响较大。考马斯亮蓝染色能力强，特别要注意比色杯的清洗。较高浓度的去污剂(Triton X-100，SDS等)、尿素和硫酸铵对测定有干扰。

 

本产品仅作科研用途