【产品特点】

◆无血清、无异源成分，性能稳定，批间差异小；

◆适用于多种来源的间充质干细胞的原代分离和传代培养，并保持多向分化潜能；

◆高细胞扩增率，支持细胞稳定传代至15代。

◆注射用水配制，通过0.1μm滤膜过滤除菌，低内毒素、无污染

【产品参数】

◆外观：澄清透明液体

◆pH值：7.2 - 7.4

◆渗透压：280 - 320 mOsm/kg·H₂O

◆内毒素：≤1 EU/mL

◆微生物检测：阴性

【备案编号】

皖合械备20240159

【注意事项】

◆收货后尽快放入保存温度，避免长时间常温保存。

◆本产品经过滤除菌，使用时应注意无菌操作，避免污染。

◆为保持本产品的最佳使用效果，请勿进行冻融处理。

【使用方法】

1、完全培养基配制方法：

1.1 将无血清基础培养基以及添加物在37℃环境下解冻、复温。

1.2 在生物安全柜中，将培养基添加物加入至无血清基础培养基中，充分混合均匀，即为完全培养基。

1.3 完全培养基建议现用现配，可在2-8℃环境中储存，需2周内用完。

1.4 可根据实际用量将添加物分装后冻存，按1:20的比例与无血清基础培养基配制使用，避免反复冻融。

2、间充质干细胞复苏（以T-75瓶为例）

2.1 将配置好的完全培养基从冰箱中取出，在生物安全柜中或超净台中吸取适量完全培养基备用（以T-75瓶为例，约10-15mL），在37℃水浴锅中复温。

2.2 从液氮中取出冻存的间充质干细胞，迅速将冻存管放入37℃水浴中，快速融解。

2.3 立即在生物安全柜或超净台将细胞悬液移入装有5-10mL细胞完全培养基的15mL离心管中。

2.4 1200rpm离心5min，弃上清，加入3-5mL完全培养基重悬细胞，精确计数。

2.5 按密度2×10⁴cells/cm²将细胞接种至细胞培养瓶中，加入适量恢复至室温的完全培养基，轻轻摇晃细胞培养器皿，使细胞均匀分布，置于37℃、5% CO₂、饱和湿度的培养箱中静置培养3天，细胞汇合度达80%-90%可选择传代。

3、间充质干细胞传代（以T-75瓶为例）

3.1 不同MSC生长速度有差异，一般在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到80-90%左右，即可传代。

3.2 提前取出间充质干细胞完全培养基、PBS、细胞消化液于37℃水浴锅中恢复至室温。

3.3 在生物安全柜或超净台中，弃去细胞培养瓶中的培养液，加入5-10mL PBS清洗细胞后弃去，再加入2mL细胞消化液消化细胞，在显微镜下观察到细胞变圆时，立即加入5mL胰酶抑制剂终止消化。

3.4 用移液器轻轻吹打瓶壁上还未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。

3.5 将细胞悬液转移至15mL离心管中，1200rpm离心5min。弃上清，加入2mL细胞完全培养基重悬细胞，台盼蓝染色计数。

3.6 按细胞密度2×10⁴cells/cm²，将细胞接种至细胞培养瓶中，加入适量恢复至室温的完全培养基，轻轻摇晃细胞培养器皿，使细胞均匀分布，置于37℃、5%CO₂、饱和湿度的培养箱中静置培养。

4、间充质干细胞冻存

4.1 如需冻存细胞，在步骤3.5后加入冻存液调整细胞密度在1×10⁶cells/mL左右，迅速将冻存管放入程序降温盒中，然后将冻存盒直接放入-80℃冰箱。

4.2 过夜放置后，将细胞从-80℃冰箱转移至液氮罐中长期保存。