耐辐射奇球菌的实验过程与注意事项！

耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans, DR)是地球上已知物种中最耐电离辐射的生物之一。它是1956 年由美国科学家Anderson 等首先从辐照灭菌后仍然发生变质的肉类罐头中分离出来的。该细菌属于极端微生物，对电离辐射、紫外线、干燥、强氧化剂和一些化学诱变剂等各种DNA 损伤介质的致死和突变效应显示惊人的抗性，被誉为“地球上最顽强的细菌”。

一、菌种简介

规格：冻干物

拉丁属名：Deinococcus Radiodurans

菌株名称：耐辐射奇球菌

收藏时间：2010/12/8

原始编号：R1 DSM 20539

原产国：中国

模式菌株：模式种

特点：世界上抗性最强的细菌

主要用途：分类；研究；教学

特征特性：细菌菌体呈杆状，分散排列，菌落直径约2-3mm，菌落为圆形，红色，表面光滑，边缘整齐。细菌无荚膜，无芽孢，革兰氏染色为阳性，细菌通过裂殖进行繁殖。该细菌为异养型细菌，在生长过程中需要氧气，不需要阳光，接触酶反应阳性，氧化酶反应阳性。该细菌的最适生长温度为30 C左右，最适环境pH为7.1左右。该细菌在生长过程中不需要添加生长因子

培养基编号：604

培养温度：30℃

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用产品信息以出库为准

二、保藏条件

安瓿瓶和斜面菌种在 2-8°C 保存。

三、培养基

53.CORYNEBACTERIUM AGAR

Caseln peptone ,typtic digest 10.0g Yeast extract 5.0g Glucose 5.0g

NaCl 5.0g Agar 15.0g Distilled water 1000.0ml Adjust ph to 7.2-7.4

四、实验过程

据了解，科学家通过电镜对耐辐射球菌观察时，发现致密有序的双链断裂碎片的环状堆积结构在DNA的重组修复起着十分重要的作用。此外，大量未知功能的特殊基因或修复酶也可能极大贡献于这种极端抗性。

在耐辐射球菌的一个天然突变中，华跃进等研究人员发现了一个重要的功能基因被一个转座子插入失活，导致了这个突变体的辐射抗性高度丧失。将野生型的这个基因用定点突变技术人为“剔除”，耐辐射球菌的耐辐射抗性几乎完全丧失。而用重组质粒让该基因在这种丧失了辐射性的菌株中表达时，其辐射抗性能回复正常，说明这个基因与辐射抗性密切相关。进一步的研究表明，这是一个辐射抗性基因的“开关”，耐辐射球菌的DNA修复机制就是由这个基因诱导启动形成的。

华跃进说，他们实验室把耐辐射球菌的这个重要功能基因命名为PPRL。最近，浙江大学核农所成功克隆了PPRL基因，并开发出大规模表达可溶性的PPRL蛋白系统，纯化和结晶的实验正在加快进行中。

专家指出，对耐辐射球菌极端抗性的研究有利于发现一批与其DNA修复和抗逆性有关的新的关键基因，了解它们的作用机制。这些独特的抗辐射性、抗逆性基因及其机制有望用于消除环境中的重金属和毒物污染，通过基因工程改善农作物，将在医学、农业、环境以及军事科学的发展上发挥作用。

五、注意事项

1）冻干粉以 200ul-500ul 无菌水或者推荐培养基的液态溶解，最适接种量为 2 支斜面（18*180试管）或者 2 支 5ml 液体（请不要在平板上，更不要在锥形瓶中复苏菌种）待菌种活化成功后才能扩大培养。如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；

2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；

3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；

4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；

5）请充分了解所购菌种的情况，尤其是该菌种的用途和生物安全信息，并且掌握必需的微生物操作技术，已具备必要的设备条件；如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理。