“艾”学习丨3D细胞培养系列
体外细胞培养的一个重要原则是需模拟体内细胞生长环境，该模拟系统中最重要的核心因素是细胞与培养环境之间的相互作用。当前细胞最主要的培养方法仍是2D培养，2D培养仅在一个平面上支持干细胞生长，无法再现生物体内细胞真实的3D立体微环境。
2D培养环境在生物活性、培养基结构、营养物质的释放等很多方面均远不及3D培养，使细胞逐渐丧失其原有的性状、形态、结构和功能，导致其研究结果与体内试验结果经常不一致，精确性较低。
三维细胞培养技术(three-dimensional cell culture，TDCC，简称3D培养)是指通过细胞聚集建立细胞球或将细胞嵌入支架上或支架内来模拟真实生物体组织的ECM（细胞外基质），进而在一定程度上模拟体内微环境。3D培养技术既能保留体内细胞微环境的物质及结构基础，又能展现细胞培养的直观性及条件可控性的优势。
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3D细胞培养基质——全新一代微载体
3D干细胞培养材料的主要作用是为细胞提供原始支撑，同时也作为可溶性因子的扩散媒介，保证干细胞与材料更好黏附、迁移、增殖、分化以及细胞的长期生长。
这里给大家介绍一款全球唯一医疗器械注册资质/药用辅料资质/GMP生产资质的 3D FloTrix™ 干细胞微载体，这款微载体为全球专利产品，由数万颗弹性三维多孔微载体组成， 孔隙率>90%，粒径大小可控于50-500μm区间， 均一度≤100μm，且生化、物理性质可定制，形成真正的3D仿生培养。
3D干细胞培养材料中适宜的空隙结构、表面活性、机械强度及生物相容性，使干细胞能更好地在3D材料上黏附、增殖、分化，建立材料内部各组分与干细胞间的紧密联系及动态相互作用，形成一定的3D结构。
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3D细胞培养扩增套装
以上细胞扩增套装包括（微载片，特异性微载体裂解液，细胞染料），主要有一下特点及优势：
1）一步接种细胞，3D TableTrix微载片™每片重量明确，即开即用。每片遇水即散成数万颗三维多孔微载体可实现一步接种细胞，直接添加微载片™和冻存或新鲜的细胞即可完成接种。
2）连续扩增，培养过程中不断添加新的微载片™,通过生物反应器程序化搅拌、自动化控温控气、智能化换补液等程序实现干细胞连续封闭式三维扩增，相比于传统二维细胞培养，节省大量人力与时间、空间成本。
3）原位冻存，经3D FloTrix™干细胞大规模培养的微组织（含细胞的微载体），通过原位冻存技术可实现微组织直接-80℃或液氮冷冻保存，同时在冻存与复苏后仍保持干细胞活性及3D微组织结构，方便3D干细胞微组织的储存、运输和临床应用。
4）裂解收获，使用3D FloTrix™ Digest特异裂解微载体，高效、温和、无残留收获高质量细胞。干细胞保持其特征：活性高、凋亡少。
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3D细胞培养生物反应器
生物反应器配置及特点：
1）定制培养瓶和蠕动泵头
3D FloTrix™ 全自动生物反应器主机最多可配备6个蠕动泵头，可根据实验需求，达到定期 、定时、定量的灌流换液，提供无菌气体交换，减少污染风险。
2）实时监测电极
反应器配备温度探头、进口pH测定仪、溶氧电极（DO探头）等也可选配葡萄糖检测部件。在大规模扩增过程中可以实时监测温度、pH及含氧量并及时做出调整。 针对监测数据进行实时可视化，同时可以记录并导出数据，方便扩增培养工艺的改进及细胞生产管理。
3）搅拌台
磁力搅拌台内置电机及磁力转子，可为磁力搅拌桨提供持续稳定及可控的搅拌动力，避免搅拌过程中剪切力对细胞的损伤。转速控制在 0-120rpm，设定精度 1rpm，速度低且精准度高。（货号：CNE-FTMS ，CNE-FTMSA）
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细胞培养-内毒素检测及清除套装
内毒素是位于革兰氏阴性细菌外膜中的脂多糖（LPS）复合物。一个大肠杆菌含有约200万个LPS分子（2 – 20 fg /细胞）。在日常实验过程中，大量的内毒素会脱落，并很容易污染实验室器具，缓冲液和下游产品。
在体外，内毒素在基于细胞的研究中引起各种问题。在体内，内毒素可能引起多种副作用，包括宿主生物体的炎症反应，器官衰竭或败血性休克。
因此，从样品和产品中去除内毒素至关重要。这款ToxOut™快速内毒素去除试剂盒（K2501）可以通过固定化的多粘菌素B快速有效地降低各类溶液中内毒素至<0.05 EU / ml。
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神经干细胞培养试剂盒
NouvNeu™hNSC神经干细胞培养试剂盒（Cat#RJ1001）是一款无血清、无动物源性蛋白且化学成分明确的适用于人源神经干细胞的培养体系。
该培养试剂盒包括基础培养基和生长调节因子，人源神经干细胞在该培养体系中可以进行正常的培养和传代，细胞形态特征稳定，并保持分化潜能，正常表达神经干细胞特异性标志物（如Nestin、Pax6、Sox2），具有电生理活性，培养得到的人源神经干细胞适用于神经毒性测试，药物筛选，药物验证以及代谢研究及电生理等应用。
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各类神经元培养试剂盒
这些神经元培养基都是无血清、化学成分明确的培养体系，适用于各类人源神经元的诱导和培养。该培养试剂盒包括基础培养基和生长调节因子，培养得到的神经元保持特定神经元的形态结构和生理功能，并具有电生理活性，适用于神经毒性测试，药物筛选，药物验证以及代谢研究，电生理，神经炎症分析等研究。
皮质神经元培养试剂盒（Cat#RJ1002）：培养得到的皮质神经元能表达皮质神经元特异性标志物（如MAP2、PSD95、Syn）。
外周感觉神经元培养试剂盒（Cat#RJ1003）：培养得到的外周感觉神经元能表达外周感觉神经元特异性标志物（如TRPV1、Nav1.8）。
多巴胺能神经元培养试剂盒（Cat#RJ1004）：培养得到的多巴胺能神经元能表达多巴胺能神经元特异性标志物（如TH、PITX3等 ）。
星形胶质神经元培养试剂盒（Cat#RJ1005）：培养得到的星形胶质神经元，神经元细胞学特征典型，能够形成轴突等结构，表达星形胶质神经元特异性标志物（如GFAP，ALDH1L1，PiTX3等）。
摘自毕特博生物公众号
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