293T细胞如何才能养得好？

 细 胞 聚 团 严 重 

经传代后严重聚团的293T细胞

图片来源于客户仅供参考

原因推断：胰酶消化操作不当导致细胞聚团。

• 消化过度或吹打过猛导致细胞受伤严重，破损的细胞碎片容易粘连聚团。

• 消化时细胞融合率太高，成片脱落，将不容易被吹散，容易聚团。

解决办法：鉴于该细胞贴壁疏松，普通0.25%胰酶消化时间控制15s-30s；吹打动作轻柔，控制在10-20次；细胞融合率达到80%传代即可传代，不可长的太满。

换血清批次后严重聚团的293T细胞

图片来源于客户仅供参考

原因推断：血清来源于动物，其组成成分有1000种左右，且血清组成及含量常随供血动物的年龄、生理条件和营养条件而异。每个批号的组分百分比含量都是不固定的，所以批间差异是存在的。293T细胞本身有聚团生长特性，但严重聚团可能受到血清里的某些因子刺激。

解决办法：先用血清试用装，试用效果好，可购买和血清试用装批次相同的正装，囤积半年或一年的用量，有效避免批间差对细胞的影响（胎牛血清在-20℃保存可达5年）。

 贴 壁 性 差 

贴壁疏松的293T细胞

图片来源于客户仅供参考

原因推断：血清存在批间差异，而293T细胞本身特点就是贴壁性差，对不同批次的血清适应性不同，就容易出现贴壁疏松现象。

解决办法：可适当加高血清比例（最高不超过20%）；建议试好一个血清批次多囤一些，可以避免血清批间差对细胞的影响。

原因推断：排除掉瓶和孔板本身材质或TC（亲水处理）处理因素外，293T细胞贴壁性变差极有可能是因为空间的隔离导致细胞自分泌或旁分泌产生的信号分子浓度太低，不利于细胞的贴壁或增殖。

解决办法：在铺板前，对孔板进行明胶包被，可有效促进细胞贴壁。

 转 染 病 毒 后 细 胞 凋 亡 严 重 

经病毒转染后漂浮凋亡的293T细胞

图片来源于客户仅供参考

原因推断：在排查了方法步骤和转染试剂，依然没有改善的情况下，可排查一下转染前的营养体系，尤其是血清批间差带来的影响。很多同学说前期培养细胞形态正常呀，其实细胞形态学只是鉴别细胞是否健康的一个外在指标，还要结合细胞其它指标对细胞健康进行评定（比如倍增时间，存活率）。

解决办法：通过更换血清批次，再进行转染实验并观察转染后的效果，比较分析出原因。