肺炎支原体的培养方法

肺炎支原体（M.Pneumonia）是人类支原体肺炎的病原体。支原体肺炎的病理改变以间质性肺炎为主，有时并发支气管肺炎，称为原发性非典型性肺炎。主要经飞沫传染，潜伏期2～3周，发病率以青少年最高。临床症状较轻，甚至根本无症状，若有也只是头痛、咽痛、发热、咳嗽等一般的呼吸道症状，但也有个别死亡报道。一年四季均可发生，但多在秋冬时节。

症状：

支原体肺炎突出表现为阵发性刺激性咳嗽。肺炎支原体感染人体后，经过2~3周的潜伏期，继而出现临床表现，约1/3的病例也可无症状。它起病缓慢，发病初期有咽痛、头痛、发热、乏力、肌肉酸痛、食欲减退、恶心、呕吐等症状。发热一般为中等热度，2~3天后出现明显的呼吸道症状，突出表现为阵发性刺激性咳嗽，以夜间为重，咳少量黏痰或黏液脓性痰，有时痰中带血，也可有呼吸困难、胸痛。发热可持续2~3周，体温正常后仍可遗有咳嗽。

支原体肺炎患者虽然自感症状较重，但胸部体检一般无明显异常体征。鼻部轻度鼻塞、流涕，咽中度充血。耳鼓膜常有充血，约15%有鼓膜炎。颈淋巴结可肿大。约10%~15%病例发生少量胸腔积液。除呼吸系统的表现外，支原体肺炎可伴发多系统、多器官损害。皮肤损害可表现为斑丘疹、结节性红斑、水疱疹等。胃肠道系统可见呕吐、腹泻和肝功损害。血液系统损害较常见溶血性贫血。中枢神经系统损害可见多发性神经根炎、脑膜脑炎及小脑损伤等。心血管系统病变偶有心肌炎及心包炎。

支原体肺炎患者胸部X线检查变化很大，病变可很轻微，也可很广泛。体征轻微而胸片阴影显著，是本病特征之一。血常规检查白细胞高低不一，大多正常，有时偏高。支原体肺炎的临床表现和胸部X线检查并不具特征性，单凭临床表现和胸部X线检查无法做出诊断。若要明确诊断，需要进行病原体的检测。目前，国内支原体肺炎的诊断主要依靠血清学检测。

分离培养方法：

1、支原体固体培养基接种法

转动拭子将标本液体尽量挤出，用无菌滴管吸1-2滴接种在平皿上盖好，用L棒涂抹或倾斜转动平皿使标本均匀分布，置37°C孵育。

2、支原体半固体培养基接种法

混种法：在制备半固体培养基时，培养基加热溶化，温度降至50°C时，添加动物血清、酵母浸液及青霉素后混匀，待冷却至37-40°C时，用无菌滴管吸取标本0.5-1ml加入培养基中，充分混匀，凝固后置37°C孵育。

3、穿刺接种法：方法同细菌接种法。

结果观察

绝大多数支原体为兼性厌氧，少数在含10% CO2和相对湿度80-90%的大气环境中生长良好。支原体生长缓慢，多数于3-4d长出菌落，少数于1-2w方长出典型菌落，在平皿固体培养基上生长的菌落呈"油煎蛋"状，边缘不整齐。

常用培养基及配方：

一、心汤复合培养基配方

牛心汤1000ml

蛋白胨10g

氯化钠5ml

酵母提取液10ml

无菌马血清200ml

1.25%醋酸铊溶液20ml

青霉素200IU/ml。

二、糖酵解培养基（肺炎支原体培养基）

1、配方一：

基础培养基 70ml

马（或牛血清） 20ml

25%酵母浸液 10ml

0.4%酚红 0.5ml

1%醋酸铊 2.5ml

青霉素10000IU/ml 5.0ml

调pH 7.8

2、配方二：

PPLO 21g（商品化买）

酵母粉 6g（OXIDE）

马血清 200ml（可用小牛血清代替）

L-半胱氨酸 0.3g

葡萄糖 10g

1%酚红 4ml

AMP 若干（0.1-0.2g，醋酸铊有毒性，可不加）

调pH 7.5-7.6

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