TaqMan 探针法实时荧光定量PCR—临床诊断“金标准”

实时荧光定量 PCR 是在传统 PCR基础上加入信号系统达到实时监测 PCR 扩增的目的，继承了传统PCR高灵敏度和操作简便的特点，同时实现了对样本的定量检测。根据信号基团的不同，实时荧光定量 PCR 可以分为染料法和探针法。非特异的染料法成本较低，但面临着类似于普通 PCR 非特异性扩增产物干扰的假阳性问题。探针法中使用的探针多是 TaqMan 探针，与染料法相比，在一定程度上避免了假阳性问题的出现。

TaqMan 探针法实时荧光定量PCR 因其重复性好、特异性强、线性范围宽等特点在各个领域有着广泛的应用， 内标系统的引入进一步提升了该方法的灵敏度，增加了其可靠性和实用性。

TaqMan 探针是利用扩增过程中Taq酶的 5’核酸外切酶活性切割与靶序列结合的寡核苷酸探针，探针5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基团并被磷酸化以防止探针在PCR过程中延伸，当引物延伸至寡核苷酸结合位置时，Taq 酶可以将其切割成小片段，使报告基团和淬灭基团分开并发出荧光，经过检测伴随扩增产物增加过程中荧光强度的增长对样本进行定量分析。现阶段使用的荧光报告基团有HEX、FAM、ROX、JOE、VIC等，荧光淬灭基团主要有TAMRA、BHQ 等。研究发现，BHQ本身具有非常低的荧光背景，实用性高于TAMRA。

常见的报告基团和猝灭基团的组合形式。

TapMan猝灭基团和报告基团的组合形式

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