基本原理：

本试剂盒利用抗体和R-PE上游离的氨基，采用定向对接偶联技术将抗体分子与R-PE共价偶联，本试剂盒采用加长臂方案，使被标记抗体与荧光蛋白之间有一定长度柔性连接臂，避免由于位阻妨碍抗体活性或者荧光蛋白发光效率。

主要特点：

ü  试剂盒组分齐全，操作简单，只要按照操作步骤进行便可得到高品质R-PE标记抗体；

ü  本试剂盒所配置的R-PE为高纯度，高活性荧光蛋白，荧光发光效率更高；

ü  本试剂采用定向偶联技术，荧光蛋白和抗体都不会发生自连，保证偶联物的特异性和均一性；

ü  试剂盒所使用的交联剂增加了延长臂，确保不会因为蛋白质位阻而影响发光效率；

ü  鉴于R-PE的蛋白骨架特性，其抗淬灭能力更强。

                                             

 试剂盒已经提供材料：

ü  活化R-PE蛋白    1mg  可用于标记0.3-0.5mg抗体

ü  标记缓冲液     30ml

ü  抗体修饰试剂    30ul*1支

ü  30KMWCO超滤管   2支

ü  封闭试剂      1支（临用前加DMSO 5ul）

ü  DMSO溶剂      200ul*1支

ü  说明书       1份

其他需要自备试剂材料：

²  待标记的生物分子；

²  移液器及吸头；

²  去离子水。

试剂盒储存

试剂盒中抗体修饰试剂和封闭试剂放在-20˚C，其余组分放在2-8℃可保存6个月以上。

试剂盒操作流程：

1.抗体的修饰

1）取待标记抗体（纯度>90%），用标记缓冲液调整浓度到 5mg/ml左右为宜，按照每mg抗体加入2μl 抗体修饰试剂，轻轻混匀，在室温下避光晃动反应 90分钟；

2）反应完毕后，将其转入30KMWCO超滤管，用标记缓冲液超滤3次（每次管芯残留液体不超过原始液量1/4），得到修饰抗体；

2.活化R-PE蛋白与抗体偶联

1）用标记缓冲液复溶活化R-PE蛋白，浓度调整为5mg/ml；

2）将修饰抗体与活化R-PE蛋白，按照质量比1:3比例（每mg修饰抗体对应3mg活化R-PE蛋白）混合，室温避光反应2小时；

3）将封闭试剂管中加入5ul DMSO,；按照每0.5mg抗体5ul比例用量加入步骤2）反应产物中，封闭未反应完的活性基团；

4）标记好的抗体分装，加入适当保护剂，-20℃保存备用。

 

 

注意事项：

1）本试剂盒中抗体修饰试剂和封闭试剂为高活性试剂，请-20℃保存；其余成份2-8℃保存、勿冻存。

2）试剂盒组份在运输过程中可能造成颠倒，会使液体或干粉试剂粘到管壁或瓶盖上。使用前请离心处理，以使附着管壁或瓶盖的液体或干粉试剂沉积到管底。

3）本试剂盒中活化R-PE蛋白需要避光低温保存，一旦复溶请一次性使用完；标记过程尽量保证其避光；

4）封闭剂需现用现配，干粉溶解后不能长期保存；

5）使用本试剂盒标记抗体，其抗体特异性要高，纯度不低于90%，最好使用单克隆抗体，溶液环境不含游离氨基，最好为PBS溶液；标记前抗体需去除NaN3和BSA，抗体的透析、浓缩和浓度测定等操作都会造成抗体量的损失，因此标记前准备抗体时需根据具体情况考虑最适的抗体量；

6）由于抗体修饰后所带的基团容易被重新氧化，因此修饰后抗体需尽快与活化的R-PE进行偶联；

7）本试剂盒中的超滤管为特殊处理的，可有效避免荧光淬灭和蛋白吸附损失，市面超滤管可能会对标记效率造成影响。

8）本试剂盒中部分试剂为高活性试剂，对皮肤和身体有一定的危害，请全程戴手套操作；DMSO属微毒类，对人体皮肤有渗透性，对眼有刺激作用，使用时避免与皮肤、眼睛和粘膜接触。