iTRAQ同位素标记定量技术
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- 2023-08-14 14:44:33
上海欧易生物医学科技有限公司
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iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）技术是由美国应用生物系统公司AB研发的一种多肽体外标记技术。该技术采用4种或8种同位素的标签，通过特异性标记多肽的氨基基团，然后进行串联质谱分析，可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量。
实验原理
iTRAQTM试剂在结构上包括3个化学基团，分别是报告基团、平衡基团和反应基团。（如下图1）
4plex iTRAQ分子结构
不同样品的同一肽段经iTRAQ试剂标记后具有相同的质量数，并在一级质谱检测（MS1）中表现为同一个质谱峰。当此质谱峰被选定进行碎裂后，在二级质谱检测（MS2）中，不同的报告基团被释放，它们各自的质谱峰的信号强弱，代表着来源于不同样品的该肽段及其所对应的蛋白的表达量的高低。
iTRAQ技术的特点
1：通量高
可一次性分析4、8个样品
2：重复性好
所有样品的分离鉴定条件一致
3：数据丰富
可获得所有蛋白的定性和定量信息
4：自动化程度高
以高分辨率液质联用为基础，自动化操作，分析速度快
5：定量准确
减少了样本处理、以及不同组上机造成的实验误差，因此能达到定量更准确的效果
6：灵敏度高
可检测到表达丰度为皮克（pg)级的蛋白，无高丰度蛋白样本（血液、脑脊液、肌肉组织、骨组织等）可检测
实验流程
注：以iTRAQ 8标为例
样本类型及含量要求
| 1 | 蛋白质提取物 | 浓度>1μg/μg（建议为4μg/μg）蛋白总量>300μg |
| 2 | 细胞样品 | 细胞量>107个 |
| 3 | 组织样品 | 动物组织>100mg；植物物质>200mg |
| 4 | 液体样本 | 血液体积>100μg,尿液>10ml，唾液>1ml |
送样要求
1
在允许的条件下，实际样品准备量应适当比样品起始量多准备一些。
2
收集样品时做好分装标记，并尽快放在液氮中冻存或转移至-80度冰箱长期保存，避免反复冻融。远距离寄样时建议用顺丰运输。
3
生物学重复的样品一定要标记清楚，建议可以用：-1、-2、-3的方式来标记。
仪器设备
Thermo Q-Exactive高分辨质谱
Sciex Triple TOF 6600质谱仪
服务流程
