Taq DNA 聚合酶
- HMD0101S、 HMD0101M、HMD0101L
- 武汉瀚海新酶
- 湖北省武汉市
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- 2022-04-30 12:07:40
武汉瀚海新酶生物科技有限公司
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- TaqDNADNA聚合酶
Taq DNA 聚合酶是一种耐热的 DNA 聚合酶，来源于水生栖热菌（Thermus aquaticus YT-1），该酶具有 5′ → 3′ 的聚合酶活性和双链特异性 5′ → 3′ 的核酸外切酶活性。
产品组分
| 组分 | HMD0101S | HMD0101M | HMD0101L |
| 5 × HH Taq Buffer | 2 mL | 4×2 mL | 8×5 mL |
| Taq DNA 聚合酶 （5 U/μL） | 50 µL | 200 µL | 1000 µL |
运输与保存方法
≤0℃运输；-20℃保存。
单位定义
使用活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物，74℃，30 min 内，摄入 10 nmol 的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为 1 个活性单位（U）。
质量控制
- 核酸内切酶残留检测：20 U 的本酶和 4 μgpUC19 DNA 在 37 ℃下反应 4 h，DNA 的电泳谱带不发生变化。
- 5 kb λDNA 扩增检测：50 μL 反应体系中加入 1.25 U 本酶，200 μM dNTP，以 5 ng λDNA为模板扩增 25 个循环后，琼脂糖凝胶电泳，可见有单一的特异性 5 kb 条带。
- 核酸外切酶检测：50 μL 反应体系中加入 12.5U 本酶，1 μM 5′ – FAM 标记的寡核苷酸，37℃孵育 30 min 无降解信号。
- RNase 残留检测：20 U 的本酶和 0.8 μg MS2RNA 在 37℃下反应 2 h，RNA 电泳谱带不发生变化。
- 热失活：无
| 组分 | 体积 |
| 模板 DNA a | optional |
| 10 µM 上游引物 | 0.5 μL |
| 10 µM 下游引物 | 0.5 μL |
| dNTP Mix (10 mM each) | 0.5 μL |
| 5 × HH Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA 聚合酶(5 U/μL)b | 0.125 μL |
| 无核酸酶水 | Up to 25 μL |
a:
| DNA | 用量 |
| 基因组 | 1 ng – 1 μg |
| 质粒或病毒 | 1 pg - 1 ng |
b: 酶量可在 0.1-0.5 μL 之间调整。加大酶量在通常情况下可以提高扩增产量，但有可能会使特异性下降。
反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 a | 95℃ | 1 min-3 min | — |
| 变性 | 95℃ | 15 s-30 s | 30-35 Cycles |
| 退火 b | 45℃-68℃ | 15 s-60 s | |
| 延伸 | 68℃ | 1 kb/min | |
| 终延伸 | 68℃ | 5 min | — |
| 终延伸 | 68℃ | 5 min | — |
a: 普通模板预变性时间 1 min，复杂模板建议 2-3 min，菌落 PCR 预变性时间建议为 5 min。
b: 建议的退火时间为 15-60 s，退火温度根据引物 Tm 确定一般在 45-68℃，一般设置成低于引物 Tm值 3-5 ℃即可。
