产品说明：

NFKB-RE-Luci细胞是基于293V细胞株构建的单克隆细胞株。该细胞株采用pLV-NFKB-Luci载体通过慢病毒系统构建。细胞中稳定转入由NFKB控制表达的FireflyLuciferase基因，可以通过Firefly Luciferase活性灵活反应NFKB转录因子活性。
细胞稳转Ranilla Luciferase内参基因。可以采用双荧光素酶试剂盒进行检测，也可以仅检测Firefly Luciferase活性。

产品资料：

品名：NFKB-RE-Luci（Rluci）细胞株（293）
货号：CS025
原始细胞株：HEK293V（HEK293T亚克隆）
构建方法：转座子构建单克隆筛选
抗性：hygromycin，blasticidin
克隆属性：单克隆细胞株
培养基：高糖DMEM+10%FBS，hygromycin 50 ug/ml，blasticidin3 ug/ml

产品包装：

1×10^6 细胞/支，1支。干冰运输。

产品验收注意事项：

1.细胞收到时应该是冻存状态，并且有干冰保护。如果收到货时细胞已融化，请立即联系我们。

2.我们建议您收到产品后立刻储存于液氮，或者对细胞进行复苏，扩增培养并大量冻存。不可保存于-20℃、-80℃冰箱。

3.由于运输影响，细胞复苏后1到3代可能出现形态异常，生长缓慢等情况。请传代培养2-3代，待细胞恢复正常再进行实验。

细胞培养基：

DMEM高糖培养基+10%FBS，Penicillin 100ug/ml，Streptomycin 100ug/ml
注意：采用质量可靠的血清非常重要！

培养基：DMEM高糖培养基+10%FBS，Penicillin 100ug/ml，Streptomycin 100ug/ml，hygromycin 50 ug/ml，blasticidin 3 ug/ml
漂洗液：PBS
消化液：0.25%胰蛋白酶+0.5mM EDTA，溶解于PBS
冻存液：DMEM高糖培养基+40%FBS+10%DMSO

初始培养（细胞复苏及培养）：

收到细胞请立即复苏。初步检查无污染、细胞存活后请扩大培养，冻存足量细胞以备以后实验使用。

1.准备37℃恒温水浴，细胞培养基，60mm细胞培养皿或者25cm培养瓶。

2.将细胞冻存管放入37℃水浴中快速融化，期间不断晃动冻存管加速溶解。

3.3000g 室温离心5min。

4.用70%乙醇清洁冻存管外壁。在超净工作台中弃去上清液。

5.用1ml培养基轻轻吹吸重悬细胞沉淀。接种到已准备细胞培养皿，补足培养基至5ml。

6.37℃，5% CO2培养24h，观察细胞贴壁情况。

7.48h后根据细胞密度换液或传代。

8.以后每2-3天传代一次。当细胞达到5×10^6个（约1个10cm培养皿的量），准备冻存液冻存细胞。剩余细胞用于实验。

注意事项：生长密度对于293细胞很重要。细胞密度达到90%（大部分细胞相互接触，细胞间有少量间隙）时需要及时传代。生长过密会造成细胞状态不可逆变差。

细胞冻存：

1.消化生长良好的细胞，用细胞培养基重悬，细胞密度为1×10^6 /ml左右。

2.加入等体积的2×冻存液（80%FBS+20%DMSO）。轻轻吹吸混匀。

3.分装到冻存管中。放入程序降温盒过夜。

4.将细胞转移到液氮罐中。

NFKB激活实验：

NFKB信号通路可以被LPS激活。

1.实验前一天将细胞株接种到24孔板，培养24h。

2.加入LPS终浓度10ug/ml，培养24h。

3.按照荧光素酶检测试剂盒说明收集细胞，并加入反应底物进行活性检测。

结果见下：