人VKORC1基因多态性检测试剂盒（rs9923231）

货号	规格	目录价	活动价
FYG-rs9923231-500T	10ul×500次	2000	-
FYG-rs9923231-1000T	10ul×1000次	3600	3420
FYG-rs9923231-2000T	10ul×2000次	6400	5760

 

产品编号：

FYG-rs9923231-500T

FYG-rs9923231-1000T

FYG-rs9923231-2000T

存储条件：

2-8 ℃ 保存，有效期1周；

-20 ℃保存，有效期6个月；

避免反复冻融。

产品组分：

编号	名称	500T	1000T	2000T
A	RealFAST Probe   PCR mix	1.4 ml×2	1.7 ml×3	1.7 ml×6
B	Primer & Probe   premix	0.25 ml×2	0.5 ml×2	0.5 ml×4
C	Lo-ROX（50×）	0.1 ml×1	0.2 ml×1	0.4 ml×1
D	ddH2O	1 ml×2	1 ml×3	1 ml×6

 

产品简介：

华法林剂量相关VKORC1基因多态性检测试剂盒（rs9923231）

本产品是基于Taqman MGB探针法开发的SNP分型试剂盒。该试剂盒具有高灵敏度、高区分度、高重复性、抗干扰性强等特征。该试剂盒包含RealFAST Probe PCR mix 、Lo-ROX、Primer & Probe premix 、ddH₂O等SNP分型所需的所有试剂，具有操作简便、分析简单、结果可靠等优点。

 

自备耗材和设备：

2 μl 移液器，10 μl 移液器，100 - 200 μl 移液器；

冰盒；

荧光定量PCR管；

实时荧光定量PCR仪。

反应设置与操作过程：

1. 探针分型：

FAM标记A型；VIC标记G型。

 

2. 反应体系：

 

PCR反应体系（10 μl）：
名称	体积（μl）
RealFAST Probe PCR mix	5
Primer & Probe premix	1
Lo-ROX（50×）	按机器品牌与型号添加
DNA	1（10 - 40 ng）
ddH2O	补足至10 μl

 

仪器型号对Lo-ROX添加的要求：
仪器	终浓度
ABI PRISM 7000 /7300 /7700 /7900HT /Step One	5×(即：Lo-ROX 1μl /10μl体系)
ABI 7500 /7500 Fast； Stratagene Mx3000P /Mx3005P /Mx4000	1×(即：Lo-ROX 0.2μl /10μl体系)
Roche仪器； Bio-Rad仪器； Eppendorf仪器	无需添加

 

反应条件：
项目	温度	时间	循环数
预变性	95 ℃	5 min	1
变性	95 ℃	10 sec	40
退火/延伸	60 ℃	30 sec

 

3. 操作过程：

1.1         试剂准备：试剂盒从-20℃冰箱取出，室温融化；涡旋仪混匀，瞬时离心待用。

1.2         用量计算：根据需要检测的样本数n，配置n+1个反应体系混合液。即5(n+1)μl RealFAST Probe PCR mix、(n+1)μl Primer&Probe premix （rs9923231）、0.2(n+1)μl  Lo-ROX（50×）、2.8(n+1)μl ddH₂O。（若反应数较大，可适当增加几个反应）

1.3         反应混合液配制：将上述计算的用量按次序用移液器加入同一新鲜干净的EP管中，涡旋仪混匀，瞬时离心。（若反应数较大，可选用较大EP管。请务必旋窝混匀！）

1.4         添加反应混合液：按照每孔9μl的量将配置好的反应体系分装至八联排（或96孔板）。

1.5         添加模版：将1μl已经定量并稀释至10 - 40 ng/μl 的DNA模板加入分装的反应体系中。

1.6         瞬时离心：八联排（或96孔板）盖上管盖（或封膜），瞬时离心，使DNA模板与反应体系混合并处于管底。（请务必进行瞬时离心，否则可能出现无扩增的结果！）

1.7         上机：将八联排（或96孔板）放入ABI7500PCR仪，根据反应条件设置ABI 7500软件，开机运行。（请根据选用的机型进行相关设置）

1.8         特别说明：配置体系过程中，需要戴一次性乳胶手套（或PE手套）；避免接触管盖（或封膜），防止污染，导致荧光信号不准确。

 

 

常见问题：

 1. 存储条件与反复冻融如何选择？

该产品-20 ℃条件下可以存储6个月；2-8 ℃可以存储1周。组分A、B、C均不能反复冻融，融化后不建议再次冻存。

2. 反应体系的确认？

该试剂盒建议反应体系10 μl。若必须使用其他反应体系，建议自行验证后在进行大量样本的检测。

3. 反应条件是否可以改动？

本试剂盒的反应条件根据多种参数确定，并适用于10 μl反应体系，为确保实验数据的准确性，不建议改动。

4. 机器设备的适用与选择？

该试剂盒适用于多种实时荧光定量PCR仪，但注意Lo-ROX的添加有所不同，请严格按照说明书执行。

5. 新学习的用户，常常出现无扩增？

该实验为精细实验，对操作要求较高，请注意严格按照说明书执行。尤其是加样、加样后的离心等。为提高实验成功率，可选择加倍反应体系，以20 μl体系进行初步学习。

6. 扩增曲线荧光信号很弱，或扩增曲线呈锯齿状？

这个问题可能有多种原因造成，常见原因及解决办法见下表。

原因	解决办法
检测光谱设定误差	不同荧光定量PCR仪的检测光谱范围有差异，根据所用的仪器型号设置检测的荧光信号范围。
荧光采集时间太短	扩增曲线锯齿状较明显时，将延伸时间设定为45 - 60 sec可得到改善。
目标DNA的拷贝数过少	目标DNA拷贝数只有几倍到几十倍时，容易形成线性混乱，提高样品浓度再进行反应。
样本浓度过低或严重降解	更换高浓度样本或质量更好样本进行实验。