牛凝血酶（Thrombin）

(科研实验专用、非药品、不可用于动物及人体)

来源：牛血浆

性状：白色或微黄色冻干粉

规格：100KU/支

比活：≥2000U/mgpr（高比活）

纯度：SDS-PAGE电泳纯度≥95%（无蛋白酶）

保存：冻干粉4-8℃保存2年

使用方法：生理盐水溶解使用，复溶后-20度冻存，适度分装，避免反复冻融

用途：凝血酶时间检测试剂（TT）配制、纤维蛋白原检测试剂（FIB）配制、TB位点

      酶切、纳豆激酶活力测定、尿激酶活力测定等，非临床治疗使用。

凝血酶（Thrombin）来源于牛血浆，分子量37KD，是由两条肽链（31KD和6KD）通过二硫键组成的。凝血酶是凝血酶原（凝血因子Ⅱ）激活后形成的蛋白质水解酶，其催化纤维蛋白原（fibrinogen）水解掉A肽和B肽，由此形成纤维蛋白单体，单体进一步聚合，在血小板、红细胞和白细胞等参与下形成血凝块。

由于凝血酶具有切割序列专一性强，水解效率高的特点，它被广泛地应用于基因工程产品的开发，其应用之一是作为工具蛋白酶用于重组融合蛋白质的特异性断裂，尤其适用于生物工程制药业及基因工程、生物化学、分子生物学等研究。

凝血酶是一种广泛用于切割标签的蛋白酶，能够有效切质量比仅为1:2000的蛋白。建议消化缓冲液:20mMTris-HCl缓冲液，150mM NaCl，pH8.0，于20℃到37℃之间切割0.3到16小时,1U可切割约0.1-0.5mg蛋白。

凝血酶最佳切割位点是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2',这里X4和X3是疏水氨基酸而X1'和X2'是非酸性氨基酸，一些经常使用的识别位点L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和M-Y-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2'之间切割比在4-X3-P-K-L-X2'更有效。其他识别位点是X2-R[K]-X1',这里X2或者X1'是甘氨酸，例如A-R-G和G-K-A，这里切割发生在第二个残基后。在凝血酶切割位点和N末端标签之间插入五个甘氨酸残基可改善切，通过这一"甘氨酸连接肽"只需较少酶量就可达到完全切割,而且也可以避免可能发生的错误切割。凝血酶可从切割产物中用p-氨基琼脂糖亲和纯化,或者苯甲脒琼脂糖移去。