BstL DNA 聚合酶
- HMD7002D、 HMD7002S、HMD7002M
- 武汉瀚海新酶
- 湖北省武汉市
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- 2022-04-30 11:31:55
武汉瀚海新酶生物科技有限公司
- 关键词
- BstL
BstL DNA 聚 合 酶 是 在 野 生 型 Bacillus stearothermophilus DNA 聚合酶 I 大片段（BstDNA 聚合酶大片段）的基础上，通过定向进化、理性设计、半理性设计等多轮分子改造进化而来，相比于野生型 Bst DNA 聚合酶大片段，BstL DNA 聚合酶显著提升了扩增速度、产量、耐盐性和热稳定性等性能。BstL DNA 聚合酶具有 5´→3´ 的聚合酶活性和强链置换活性，但没有 5´→3´ 核酸外切酶活性。使用本产品能够大幅度提升环介导等温扩增（LAMP）体系的性能。
注：BstL DNA 聚合酶的贮存液为：10 mMTris-HC（lpH 7.1）, 50 mM KCl, 0.1 mM EDTA,1 mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50%甘油。
产品组分
常规浓度
| 组分 | HMD7002S | HMD7002M |
| BstL DNA 聚合酶 （8 U/μL） | 100 μL | 1000 μL |
| 10×HH BstL Buffer | 2.0 mL | 2×2 mL |
| MgSO4 (100 mM) | 1.5 mL | 2×1.5 mL |
高浓度：
| 组分 | HMD7002D |
| 高浓度 BstL DNA 聚合酶（240 U/μL） | 25 μL |
| 10×HH BstL Buffer | 1×5 mL |
| MgSO4（100 mM） | 2×1.5 mL |
| BstL Dilute Buffer（Glycerol free） | 1 mL |
应用
1）用于 LAMP 等温扩增体系检测靶标 DNA；
2）与瀚海 RTL 逆转录酶产品联合使用，进行RT-LAMP 等温扩增检测靶标 RNA。
运输与保存方法
0 ℃以下运输，-20 ℃保存。避免反复冻融，产品有效期 18 个月。
活力定义
65 ℃, 30 min 内使 10 nmol 的 dNTP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定义为 1 个活性单位 (U) 。
质量控制
核酸内切酶残留检测：基于 HH BstL 反应缓冲液配制 50 µL 反应体系，其中包含 1 µg 的pUC19 DNA 和 500 U 本酶 ，在 37 ℃下孵育4 小时，由琼脂糖凝胶电泳检测，pUC19 DNA电泳条带没有明显变化。
核酸外切酶残留检测：基于 HH BstL 反应缓冲液配制 50 µL 反应体系，其中包含 1 µg 的 Lambda-HindIII DNA 和 500 U 的本酶，在 37 ℃下孵育 4 小时，由琼脂糖凝胶电泳检测，电泳条带没有明显变化。
RNase 残留检测：基于 HH BstL 反应缓冲液配 制 10 µL 反应体系，其中包含 40 ng 的 MS2 RNA (3500 nt) 和 8 U 本酶 ，在 37 ℃下孵育 16 小时，由琼脂糖凝胶电泳检测，电泳条带 没有明显变化。
大肠杆菌 DNA 残留检测：120 U 本酶中残留 的核酸经E.coli gDNA特异性的TaqMan qPCR 检测，E.coli 基因组残留低于 1 拷贝。
实验流程
1）将 10×HH BstL Buffer 取出，冰上解冻，使 用前涡旋 10 s 混匀，并短暂离心。
2）除模板 DNA 外，其余组分按下表顺序配 制反应混合液。
| 物质名称 | 体积 | 终浓度 |
| 10×HH BstL Buffer | 2.5 μL | 1× (含有 2 mM 镁离子) |
| MgSO4 (100 mM) | 1.5 μL | 6 mM (总共 8 mM) |
| dNTP Mix (10 mM each) | 3.5 μL | 1.4 mM |
| FIP/BIP Primers (25×) | 1 μL | 1.6 μM |
| F3/B3 Primers (25×) | 1 μL | 0.2 μM |
| LoopF/LoopB Primers (25×) | 1 μL | 0.4 μM |
| BstL DNA 聚合酶 (8 U/μL) | 1 μL | 320 U/mL |
| 模板 DNA | x μL | >10 拷贝 |
| Nuclease-free Water | up to 25 μL | - |
3）用移液器吹打混匀，并短暂离心。
4）60-65 °C 恒温孵育 1 h，观察扩增产物。
