原位末端凋亡法（Tunel）实验
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- 2022-11-30 17:45:43
北京亿鸣复兴生物科技有限公司
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★服务描述：
TUNEL细胞凋亡检测 (TUNEL Apoptosis Assay) 是一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现 180-200bp的DNA ladder。
基因组DNA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞。
★服务内容：
TUNEL细胞凋亡检测 (TUNEL Apoptosis Assay) 是一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现 180-200bp的DNA ladder。
基因组DNA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞。
★服务内容：
组织切片/细胞爬片
常规TUNEL检测
荧光TUNEL试剂盒检测
数据整理及结果分析
根据客户需要对细胞核进行荧光染色
★需要提供的信息：
悬浮生长培养细胞的甩片或涂片
贴壁生长的培养细胞
冰冻切片
常规石蜡切片
取材保持组织新鲜（组织块以小于2cm×1.5cm×0.3cm为宜），立即放入固定液（固定液用10%福尔马林液或4%福尔马林缓冲液，体积为组织块的10倍以上）中，避免干燥；对于有血迹的样本，可用PBS液或生理盐水冲洗后直接放入固定液中；经固定后的样本必须在48小时内处理。
★服务价格：
★服务价格：
★服务周期：
15~20天
★提供结果：
15~20天
★提供结果：
成像图片（或按客户需要排列图片，达到可直接发表水平）
实验详细流程
原始数据
标记后（处理后）的样本
★服务说明：
由客户提供荧光TUNEL检测试剂盒
本公司保证数据的客观性、准确性，但不保证与客户预期吻合
结果分析时注意：在坏死的晚期阶段或在高度增殖/代谢的组织细胞中可产生大量DNA片断，从而引起假阳性结果；而有些类型的凋亡性细胞死亡缺乏DNA断裂或DNA裂解不完全，以及细胞外的矩阵成分阻止TdT进入胞内反应，进而产生假阴性结果。
初次检测细胞凋亡，最好设置阳性对照片。血细胞含量高的组织，尽可能延长过氧化氢的灭活时间。苏木素的复染时间需要摸索。
每片所加试剂可调整，一般30~100 ul不等，但也要防止液体挥发而干片，且反应均在放置湿盒内。
★其他服务项目：
★项目一般流程：
