三色多重荧光染色试剂盒  (双标三色)

原理介绍: 酪酰胺信号放大(TSA，  Tyramide signal amplification)技术是一类利用辣根过氧化酶          ( HRP)  对靶蛋白进行标记的酶学检测方法，  类似常规免疫组化的 DAB 显色方法  ，  TSA 技术同样采 用 HRP 标记的二抗，  同样有对应的“显色”步骤  ( HRP 催化加入反应体系的酪胺荧光素底物，  产生 活化荧光底物，  活化底物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合，  使样品上稳定的共价结合酪胺荧光   素。之后用热修复法洗去非共价结合的一抗-二抗-HRP 复合物，  重复下一种一抗-hrp二抗来第二轮孵 育，  换另一种酪胺荧光素底物，  如此往复就可实现多重标记。

TSA 详细原理是利用酪胺 Tyramide 的过氧化物酶反应(酪胺盐在 HRP 催化 H202 下形成共价键结

合位点)，  产生大量的酶促产物，  该产物能与周围的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结   合，  这样在抗原-抗体结合部位就有大量的荧光素沉积，  结果使其检测信号得到 10-100 倍增强。简单 来说，  用这种方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的 HRP  (而不是直接偶联荧光素)  ，  来催化后续 添加入体系的非活性荧光素。荧光素在 HRP 和过氧化氢的作用下被活化，  跟临近蛋白的酪氨酸残基   共价偶联，  使得蛋白样品与荧光素稳定结合。然后微波或煮沸或者水浴等热修复处理，  前一轮非共价 结合的抗体被洗掉，  共价结合的荧光素稳定共价结合在样本切片蛋白上。再换个一抗来第二轮孵育 ， 周而复始。等到所有抗体孵育结束，  荧光素都结合好后，  最后去检测结果。  由于每次体系中都只有单 一抗体孵育，  因此无需担心抗体交叉反应，  以及一抗二抗种属匹配问题，  大大减少了实验设计时不同 种属抗体选择匹配的限制。也就是说，  如果用 TSA 技术，  同一张片子上所有的靶标都可以选用特异性 高的兔单克隆抗体。搭配同一支抗兔的 HRP 二抗就可以进行实验，  而且信号放大的倍数大大增强。   本公司开发的试剂盒具体酪胺荧光染料为以下其中一种或者多种：   480，   520，   570 ，    620，   690，   780。此试剂盒中的荧光染料可单独或配合使用。可以实现单标、双标、   三标以及更多重荧光放大/多重同源抗体荧光标记等功能，  极大丰富了此试剂盒的内涵。

试剂盒组成：   520 荧光染料(绿光)(即用型，  5mL),-20℃；   570 荧光染料  (红光)  (即用型， 5mL)，  -20℃；  TSA+增强剂，  100ul，   -20℃  (可选)  ；                                                                 高敏多聚 hrp 山羊抗兔二抗  ( 5mL)   4℃。

备注：   520 荧光染料 、 570 荧光染料 在-20 度下，  均为固体，  使用之前需解冻。

TSA+增强剂使用方法：  TSA+增强剂能够进一步增强荧光信号放大液的放大信号 5-10 倍，  TSA+增

强剂：   荧光放大液=1:500，  使用 TSA+增强剂不是必须的选项，  可以根据具体的情况选择添加 或者不选择添加。