产品描述

Seplife G100 M葡聚糖层析介质是一种具有三维网状结构的高分子化合物，它是由葡聚糖加入交联剂环氧氯丙烷通过醚键互相交联聚合而成，交联度越大，网孔结构就越紧密，吸水后的体积膨胀就越小，能允许进入层析介质内部的分子的分子量也就越小，反之亦然。层析时，大于层析介质孔径的大分子，被阻于凝胶相外，沿着层析介质颗粒之间的间隙走，下移速度最快，故最先洗脱下来，中等大小的分子进入部分层析介质孔中，洗脱速度次之，而小分子因为能够进入全部层析介质孔中，受到阻力最大，故最后被洗脱下来，由此，物质得到分离和纯化。Seplife G100 M葡聚糖层析介质适用于蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定、细胞分离等。

产品属性参数

说明书

使用方法

3.1预处理

葡聚糖凝胶过滤层析介质一般是干粉状态，使用前必须在过剩的缓冲溶液（蒸馏水）中进行溶胀（室温溶胀过夜，或者在沸水中溶胀1h，避免使用磁力搅拌、药匙或者玻璃棒搅拌造成填料损坏）。溶胀后，使用缓冲液进行调节，形成浓稠的浆液，75%（体积百分比）左右，再进行脱气。

注：在溶胀前加入缓冲溶液（蒸馏水）使其自然沉降，自然沉降后若上层溶液中漂浮的凝胶碎片颗粒多，需要重复多次漂洗将其除去，防止层析时阻塞凝胶柱，影响流速。

3.2 装柱

装柱按照标准操作规程操作。必须保证每种材料都处于工作温度，凝胶装柱前需要脱气。

3.3平衡

使用2~5倍柱床体积的上样平衡液平衡柱子，务必使流出液的电导和pH同上样缓冲液的电导和pH完全一致。

3.4上样

（1）介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的，分子量大的先流出来。

（2）凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在40-50 cm 以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5：1即可。

（3）样品中如有杂质或沉淀应该在上样前过滤或离心除去，样品的粘度不能过高，否则影响分离效果。

3.5洗脱

可以采用无盐水，也可以采用用平衡缓冲液做洗脱剂进行洗脱。在平衡缓冲液中加入NaCl等梯度洗脱或者盐梯度洗脱都可以完全分离。

3.6在位清洗

凝胶使用10次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向洗4个柱床体积，再以至少3个柱床体积平衡缓冲液再生。

3.7存储

干粉保存在4~30℃，干燥、通风、清洁处；溶胀后的介质保存在4~8℃，20%乙醇溶液中，避免与氧化剂接触，不可冷冻。

3.8运输

运输中避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。

4.注意事项

（1）样品必须澄清没有颗粒。

（2）样品与层析介质必须用洗脱缓冲液彻底平衡后，才能进行柱层析。 

（3）所装的柱床必须表面平整，无沟流及气泡，否则应重装。

（4）洗脱过程中应严格控制流速，且勿过快。

（5）加样及整个洗脱过程中，严防柱面变干。

（6）本品应避免与氧化剂接触，避免长时间暴露在空气中。 

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