蛋白酶K
- HH4508
- 武汉瀚海新酶
- 湖北省武汉市
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- 2022-04-27 23:17:22
武汉瀚海新酶生物科技有限公司
- 关键词
- 蛋白酶K
- 外观
- 无色至浅棕色液体
蛋白酶 K 是一种丝氨酸蛋白酶，具有高效的酶活性和广泛的底物特异性，能优先分解与疏水性氨基酸、含硫氨基酸、芳香族氨基酸 C末端邻接的酯键和肽键，常被用于降解蛋白生产短肽。它具有丝氨酸蛋白酶类所特有的典型催化三联体 Asp39-His69-Ser224 特征并且活性中心周围有两个 Ca2+结合位点增加其稳定性，使其在更广泛的条件下保持较高的酶活力。
用途
1.基因诊断试剂盒；2.RNA 和 DNA 提取试剂盒；3.提取组织中非蛋白成份，降解蛋白质类杂质，譬如 DNA 疫苗和肝素的制备；4.制备脉冲电泳的染色体 DNA；5.蛋白质印迹；6.用于体外诊断领域酶法糖化白蛋白试剂的研发和大量生产。
活性测定方法
酶活定义单位酶活定义为在规定条件下，每分钟水解酪蛋白生成 1 μmol L-酪氨酸所需的酶量。
试剂准备
试剂 I：底物：1%牛奶乳酪蛋白溶液：1 g 牛奶乳酪蛋白溶于 50 ml 0.1 M 磷酸钠盐溶液，pH 8.0，65-70 ℃水浴孵育 15 min 搅拌解，自来水冷却，氢氧化钠调节 pH 8.0，定容 100 ml。
试剂 II：TCA 溶液： 0.1 M 三氯乙酸，0.2 M乙酸钠，0.3 M 乙酸(依次称取或量取 1.64g三氯乙酸+1.64g 乙酸钠+1.724ml 乙酸，加入 50ml 纯水中，HCl 调节 pH 4.03，定容100ml）。试剂 III：0.4 M 碳酸钠溶液（称取 4.24g 无水碳酸钠溶解于 100ml 水中）。试剂 IV：福林酚试剂：用纯水 5 倍稀释。试剂 V：酶稀释液：0.1 M 磷酸钠盐溶液，pH 8.0。试剂 VI：L-酪氨酸标准溶液：0、0.005、0.025、0.05、0.075、0.1、0.25 umol/ml 的 L-酪氨酸标准溶液，用 0.2 M HCl 溶解。
