Bst DNA 聚合酶 大片段
- HH7001S、HH7001M
- 武汉瀚海新酶
- 湖北省武汉市
- 现货
- 800U
- 8000U
- 0 元
- 2022-04-27 23:17:22
武汉瀚海新酶生物科技有限公司
- 关键词
- BstDNADNA聚合酶
本品为无色液体溶液。Bst DNA 聚合酶来自于 Bacillus stearothermophilus，具有 5´→3´聚合酶活性，但没有 5´→3´核酸外切酶活性。本产品采用大肠杆菌表达，可适合用于等温扩增。注：贮存于 10 mM Tris-HCl (pH 7.1), 50 mMKCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50%甘油。
产品组分
| 组分 | HH7001S | HH7001M |
| 10×Bst Buffer | 300 μL | 3×1000 μL |
| Bst DNA 聚合酶 （8 U/μL） | 100 μL | 1000 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 200 μL | 2000 μL |
应用
1) DNA 等温扩增；
2) 用于高 GC 含量的 DNA 序列测序
3) 用于纳克级 DNA 序列扩增。运输与保存方法冰袋运输，-20℃保存。避免反复冻融，产品有效期 18 月。单位定义65℃, 30 min 内使 10 nmol 的 dNTP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定义为 1 个活性单位(U)。
质量控制
核酸内切酶残留检测：一个 50 µl 的反应在 Bst反应缓冲液中，包含 1µg 的 PUC19 DNA 和500 U 的 Bst DNA 聚合酶 大片段，在 37°C 下孵育 4 小时，由琼脂糖凝胶电泳检测，电泳条带没有明显变化。核酸外切酶残留检测：一个 50 µl 的反应在 Bst反应缓冲液中，包含 1µg 的 Lambda-HindIII DNA 和 500 U 的 Bst DNA 聚合酶大片段 ，在 37°C 下孵育 16 小时，由琼脂糖凝胶电泳检测，电泳条带没有明显变化。RNase 残留检测：一个 10 µl 的反应在 Bst 反应缓冲液中，包含 40 ng 的 RNA (3500 nt) 和8 U 的 Bst DNA 聚合酶大片段 ，在 37 °C 下孵育 16 小时，由琼脂糖凝胶电泳检测，电泳条带没有明显变化。
大肠杆菌 DNA 残留检测：
120 U 本酶中残留的核酸经 E.coli gDNA 特异性的 TaqMan qPCR检测，E.coli 基因组残留低于 1 拷贝。
实验流程
1) 将 10×Bst Buffer 取出，冰上解冻，使用前
涡旋 10 s 混匀，并短暂离心收集。
2) 除模板 DNA 外，其余组分按下表顺序配置反应体系。
反应体系
| 物质名称 | 体积 | 终浓度 |
| 10×Bst Buffer | 2.5 μL | 1 ×(含有 2 mM 镁离子) |
| MgSO4 (100 mM) | 1.5 μL | 6 mM (总共 8 mM) |
| dNTP Mix (10 mM) | 3.5 μL | 1.4 mM |
| FIP/BIP Primers (25×) | 1 μL | 1.6 μM |
| F3/B3 Primers (25×) | 1 μL | 0.2 μM |
| LoopF/LoopB Primers (25×) | 1 μL | 0.4 μM |
| Bst DNA 聚合酶(8 U/μL) | 1 μL | 320 U/mL |
| 模板 DNA | X μL | >10 拷贝 |
| Nuclease-free Water | up to 25 μL | — |
| Nuclease-free Water | up to 25 μL | — |
4) 60-65℃恒温孵育 1 h。
