基因编辑细胞株构建
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- 2023-02-20 14:54:36
铭时医疗科技（宁波）有限公司
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基因组编辑技术（genome editing）是一种可以在基因组水平上对DNA序列进行改造的遗传操作技术。这种技术的原理是Cas9蛋白在sgRNA指定的基因组位置切断DNA，切断的DNA在被细胞内的DNA修复系统修复过程中会产生突变，从而达到定点改造基因组的目的。DNA修复系统主要通过两种途径修复DNA双链断裂（double-strand break,DSB）,即非同源末端连接（Nonhomologous end joining, NHEJ）和同源重组（homologous recombination, HR）。
基因编辑细胞株包括基因敲除细胞株、基因激活细胞株、点突变、基因敲入细胞株等。
基因敲除细胞株
CRISPR-Cas9这种靶向特异的DNA内切酶切割目的DNA产生双链DNA断裂(DSB)，断裂的DNA招募细胞内DNA修复机制进行修复。在没有外源同源DNA序列时，细胞主要通过NHEJ途径将断裂的DSB位点连接起来。NHEJ介导的连接保真性不高，容易产生插入或者缺失(indel)，往往导致蛋白质编码基因的移码突变，从而达到基因敲除的目的。
常见基因敲除细胞株类型
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分类标准
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类别
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基因敲除策略
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移码突变、片段敲除、多基因敲除等
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细胞类型
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肿瘤细胞、细胞株、IPS等
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基因激活细胞株构建
将切割活性缺失的Cas9蛋白（dCas9）与转录因子（TF，如VPR等）融合，利用dCas9可在sgRNA指导下结合于基因的启动子区域，融合的转录因子招募其他转录机制，从而提高此基因的转录水平，实现基因的功能增强（gain of function）。
点突变和基因敲入细胞株
基因点突变是指将外源突变位点通过同源末端重组（HDR）的方式与基因组中特定位点进行替换，从而达到基因的定点突变并获得稳定遗传的一种技术。目前点突变的实现方式主要为CRISPR/Cas9系统联合Donor序列同时转入细胞，通过胞内的同源重组修复机制在Cas9切割位点处引入Donor序列上含有点突变位点的基因序列。
服务流程
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我们可以提供基因敲除，点突变、基因敲入、基因激活等细胞株的构建
