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支原体检测试剂盒
  • PV-myco
  • 东岭生物
  • 上海市
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  • 2022-08-24 14:46:57

上海乐赛生物科技有限公司

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在细胞培养中,良好的实验规范和定期检测支原体污染也十分必要。支原体检测的方法有很多种,如直接培养、DNA 荧光染色、ELISA和PCR法等。本产品主要采用PCR方法对各种生物材料(如细胞培养物、实验动物分泌物、动物血清等)支原体感染的检测。通过PCR方法检测培养细胞等生物材料中的支原体,所用引物为根据支原体16S-23S rRNA序列保守区域设计,只特异性扩增支原体 DNA,检出灵敏度与特异性均较高。PCR扩增及电泳分析只需数个小时,操作方便简单。

产品特点
►方法学:PCR法
►特点:灵敏、特异、快速,操作简便


产品成分

组分编号

组分名称

规格

储存条件

-A

Green Taq Mix

250µl

-20℃

-B

ddH2O

250µl

-C

Positive Control Template

50µl

-D

Primers

50µl


使用说明
(请详细阅读使用说明后再开始相关实验)
  1.待测细胞连续传代3次或培养至两周;
  2.细胞达到80% confluency或以上的时候,取1ml上清,进行低速离心(300g,5min,4℃);
  3.离心结束后取950μl上清液,转移至新的无菌EP管中,以去除培养基中的细胞;
  4.将上清液高速离心(12000g,10min,4℃),离心结束后,去除900μl上清,剩余50ul用以重悬沉淀(可能肉眼不可见);
  5.将重悬好的沉淀放置4度冰箱,作为PCR的模板备用;
  根据下表,配制PCR反应液

试剂

实验组

阳性对照

阴性对照

A

12.5µl

12.5µl

12.5µl

待测样品

5µl

/ /

C

/

5µl

/

B

5.5µl

5.5µl

10.5µl

D

2µl

2µl

2µl

注:为防止Positive Control Template 污染,请将实验组和阴性对照组加完以后,最后再将C液加入阳性对照组
  6.PCR程序   

步骤

温度

反应时间

循环数

Step 1

95℃

5min

1

Step 2

94℃

30s

5

50℃

30s

72℃

35s

Step 3

94℃

15s

23

56℃

15s

72℃

30s

Hold

12℃

/

  7.制备DNA gel:称取一定量Argrose粉末,用1X TAE buffer配制成1.5%的DNA GEL;
  8.待PCR反应结束后,取8-10μl的PCR 反应液(无需要加 loading buffer)直接进行1.5%琼脂糖凝胶电泳,确认PCR扩增产物;
  9.目的条带为518bp。示例如下:

推荐使用频率

新细胞进入实验室

必检

液氮保存前

必检

定期常规

每月一次

发现污染后

每周一次

发现细胞异常

随时检测

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