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Hela299人宫颈癌细胞的处理方法

发布时间:2022-08-08 10:51:26 I 企业名称:智立中特(武汉)生物科技有限公司I 作者:
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一、细胞简介:

  Hela299细胞对脊髓灰质炎病毒有一定抗性;Hela299角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。

  细胞名称:Hela299人宫颈癌细胞

  平台编号:zl-056686

  种属人

  年龄(性别)

  组织来源子宫颈;腺癌

  生长特性贴壁

  细胞形态上皮细胞样

  生长培养基RPMI-1640+10%FBS+1%P/S

  培养条件气相:空气,95%;CO2,5%温度:37℃

  二.细胞处理:

  1)冻存细胞的复苏:

  将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

  2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

  对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:

  1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

  2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

  3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

  3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

  下面T25瓶为例;

  1.细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

  2.1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞,按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。

  3.将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

 

 

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