U266人外周淋巴细胞

 

　　细胞名称：U266人外周淋巴细胞

 

　　年龄（性别）

 

　　组织来源

 

　　生长特性悬浮

 

　　细胞形态淋巴母细胞样

 

　　生长培养基RPMI-1640＋10%FBS＋1%P/S

 

　　培养条件气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃

 

　　该细胞来源于多发性骨髓瘤男性患者，表达IgG，分泌IL-6。

 

　　二、细胞特性

 

　　1）来源：人骨髓

 

　　2）形态：淋巴母细胞样,悬浮生长

 

　　3）含量：>1x106细胞数

 

　　4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

 

　　5)用途：仅供科研使用。

 

　　三、运输和保存

 

　　干冰运输及复苏好存活细胞

 

　　（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

 

　　（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

 

　　四、细胞接收后的处理

 

　　1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

 

　　2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

 

　　3）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的培养基）。

 

　　4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞。收到细胞后传代建议T25培养瓶1：2传代。

 

　　一．培养基及培养冻存条件准备：

 

　　1）准备RPMI-1640（含NaHCO31.5g/L推荐iCell-128-0002或者GIBCO,货号31800022,添加NaHCO31.5g/L,或者ATCC-formulatedRPMI-1640Medium,CatalogNo.30-2001ATCC改良）培养基；胎牛血清，15%；双抗，1%。(注意：该细胞培养PH值不超过7.0）

 

　　2）该细胞在1640(含1.5g/LNaHCO3)培养基中生长良好，大部分品牌的1640含有较高浓度的NaHCO3（3.7g/L），若使用1640（3.7g/LNaHCO3）培养基培养细胞时需要提高CO2浓度（7%-10%）。

 

　　3）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

 

　　4）冻存液：基础培养基+20%FBS+8%DMSO(细胞培养)。

 

　　二．细胞处理：

 

　　1）冻存细胞的复苏：

 

　　将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

 

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

 

　　对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

 

　　悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在1×105~1×106个/mL（不同细胞对密度要求不同，）可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

 

　　3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。