骨肉瘤组织芯片制作技巧及心得体会

随着生物芯片技术研究不断发展，尤其在生物医药、食品检测等方面的应用越来越广泛；组织芯片（TMA）在临床和基础医学科研教学方面也担当起重要角色。其高通量、一致性特点缩短了寻找肿瘤基因和相关特异性抗体的进程；同时对于大数据应用于批量检测和开发生物试剂开辟了美好的前景。

骨肉瘤组织芯片由于其含骨量多，受组织脱钙影响等原因，导致芯片经常会出现缺点，有效靶组织少或者细胞变性等无效点增多，从而影响组织芯片质量。我们经过不断探讨和实践，较好的解决了芯片掉点和有效靶组织少及细胞变性等问题。提高了组织芯片核心质量，在抗体研发、肿瘤研究和基因检测等领域得到广大科研、临床及教学机构的好评。现将骨肉瘤组织芯片制作技巧及心得体会分享如下：

（一）骨肉瘤组织芯片制作前期关键点

1、供体筛选

1.1 对供体组织蜡块切片染色进行病理诊断和对有效靶组织的标记，诊断上要求病理分型准确，组织新鲜度评估，在具有骨肉瘤典型组织学特征的有效靶组织区域进行标记。我们采取精准局域标记法和精准涂鸦标记法（已经申请发明专利）。

1.2 供体蜡块的处理，对于和受体蜡熔点不同的蜡块进行融合调整，尽可能和受体蜡块熔点一致。对于熔点相同供受体蜡块直接使用。

2、微阵列设计

2.1 从物理学和平面排列以及实用性角度综合设计出最佳骨肉瘤组织芯片排列方式，从而避免不同组织类型和异质性强大的骨肉瘤导致各个位点出现染色不均匀，点间距和行列间距出现不整齐影响实验结果。

2.2 根据不同的需求加入或不加入正常骨组织对照的例数。

（二）组织芯片制备关键点

1.受体蜡块制备注意将高纯度石蜡（我们用徕卡石蜡，熔点60°-62°）倒入模具不能出现气泡、裂痕和分层，一定要在室温下凝固。

2.尽可能在组织从供体蜡块向受体蜡块转移前，确定好受体蜡块打孔深度，争取一次完成。

3.将供体组织柱芯向受体孔内转移时，手法要灵活，动作一定要轻柔，这样可以避免点不圆，有效靶组织减少等一系列问题。

（三）骨组织组织芯片为什么容易掉片及解决办法

1.组织固定及处理的不好，解决办法：对供体组织进行严格筛选，将收集供体蜡块切片染色，用高精度扫描仪扫描复诊后进行有效靶组织标记，剔除出血坏死、退变及骨组织较多区域。标记区域用做在组织芯片制芯。

2.骨肉瘤芯片组织内含骨量多，尤其对于含有软骨较多组织其粘附力差，脱钙后容易造成组织细胞变性，加重了其低粘附力。因此根据物理学原理我们设计微阵列使，把含骨或软骨量多的组织尽可能排列到芯片近中央区，有效的减少了芯片掉点现象。这对于免疫组化实验打下良好的基础。

3.提高芯片切片技术，骨组织芯片要求切片一定要切薄，一般小于4微米。我们目前芯片厚度掌握在4微米。图1，2，3

图1 中密度骨肉瘤组织芯片 HE扫描 10X

图2 低密度骨肉瘤组织芯片 HE扫描 6X

图3 高密度骨肉瘤组织芯片 HE扫描 8X