【生化诊断原料酶】肌氨酸氧化酶
肌氨酸氧化酶
Sarcosine oxidase
Sarcosine + O2 + H2O ⇉
Glycine + HCHO + H2O2
酶学性质
最适pH
37℃, buffer solution: pH 6.0-7.5, Na-phosphate;
pH7.5-9.0, Tris-HCl; pH 9.0-10, Glycine-NaOH.
Enzyme concentration: 1 mg/mL.
最适温度
5 min-reatcion in Tris-HCl buffer pH 8.0.
Enzyme concentration: 1 mg/mL.
pH稳定性
37℃ , 60 min-treatment with 100 mM
buffer solution:
pH 5.0-6.0, Acetate; pH 6.0-7.5, Na-phosphate;
pH7.5-9.0, Tris-HCl; pH 9.0-10, Glycine-NaOH.
热稳定性
10 min-treatment with 100 mM
K-phosphate buffer, pH 7.5.
Enzyme concentration: 1 mg/mL.
稳定性 （-20℃保存）
活性测定方法
原理：肌氨酸氧化酶催化Sarcosine生成H2O2，辣根过氧化物酶催化H2O2与2-羟基-3-间甲苯胺丙磺酸钠（TOOS）和4-氨基吡啶（4-AA）反应，生成紫色可溶化合物醌亚胺。检测反应液555 nm处吸光度值变化，测定产物生成量。
酶活定义：单位酶活定义为在下述条件下每分钟催化Sarcosine生成1微摩尔H2O2所需的酶量。
试剂准备
试剂 I：0.2 M Tris‒HCl缓冲液 (pH 8.0)，0.05 ml
1.0 M Sarcosine底物溶液，0.10 ml
100 U/ml辣根过氧化物酶溶液，0.025 ml
15 mM 4‒AA溶液，0.05 ml
15 mM TOOS溶液，0.05 ml
去离子水，0.225 ml。
试剂 II：反应终止液，无水乙醇。
试剂 III：酶液，使用10 mM磷酸钾缓冲液 (pH 7.5) 进行稀释。
操作步骤
取0.5 ml试剂I 37℃预热5 min，加入试剂III 0.01 mL，混匀，37℃下反应5 min后，加入2.5 mL试剂II 终止反应。使用紫外分光光度计测定反应液在555 nm处吸光度值。
向反应液中加入0.01 mL 10 mM磷酸钾缓冲液（代替试剂III），相同条件下测定吸光度值，设定为空白对照。
主要用途：用于临床研究中肌酐酶法检测
咨询
- 385
- 点赞
- 复制链接
- 举报
