【生化诊断原料酶】肌酐酶
肌酐酶
Creatinine amidohydrolase
Creatinine + H2O ⇋Creatine
酶学性质
主要用途：用于临床研究中肌酐酶法检测
最适pH
37℃, buffer solution:
pH 6.0-7.5, Na-phosphate;
pH7.5-9.0, Tris-HCl; pH 9.0-10, Glycine-NaOH.
Enzyme concentration: 1 mg/mL.
最适温度
10 min-reatcion in K-phosphate buffer pH 8.0.
Enzyme concentration: 1 mg/mL.
pH稳定性
25℃,120 min-treatment with 100 mM buffer solution:
pH 5.0-6.0, Acetate; pH 6.0-7.5, Na-phosphate;
pH7.5-9.0, Tris-HCl; pH 9.0-10, Glycine-NaOH.
Enzyme concentration: 1 mg/mL.
热稳定性
60 min-treatment with 100 mM
Tris-HCl buffer, pH 8.0.
Enzyme concentration: 1 mg/mL.
稳定性 （-20℃保存）
活性测定方法
原理：肌酐在肌酐酶催化下生成肌酸，通过检测反应液525 nm处吸光度值变化，测定产物生成量。
酶活定义：单位酶活定义为在下述条件下每分钟催化生成1微摩尔肌酸所需的酶量。
试剂准备
试剂 I：磷酸钾buffer，0.3 M，pH 8.0。
试剂 II：肌酐溶液，0.1 M。
试剂 III：碳酸钠溶液，浓度为4%。
试剂 IV：α-萘酚溶液，浓度为2%，溶于无水乙醇中。
试剂 V：碱性溶液，含1.2%氢氧化钠和3.2%碳酸钠。
试剂 VI：二乙酰溶液，浓度为0.05%。
操作步骤
1. 取0.1 mL试剂 I与0.8 mL试剂 II在5 mL EP管中混匀，37℃孵育5 min。
2. 加入0.1 mL酶液，37℃孵育10 min。
3. 加入2.0 mL试剂 III，混匀，并将反应EP管置于冰水中。
4. 吸取步骤3中的混合液0.1 ml，依次添加0.9 mL双蒸水，0.5 mL试剂 IV，0.5 mL试剂 V和0.5 mL试剂 VI。
5. 25℃放置1小时，并添加2.5 mL双蒸水稀释。
6. 读取525 nm处吸光度值。
向反应液中加入0.1 mL 10 mM磷酸钾缓冲液（代替酶液），相同条件下测定吸光度值，设定为空白对照。
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