SD大鼠乳鼠心脏微血管内皮细胞原代分离培养方法

1. 将新生24h的SD大鼠用75%乙醇浸泡5min，开胸，取出心脏后于含有双抗的预冷过的D-HANKS中漂洗两遍，移入超净台。

2. 仔细剪除大血管，左右心房及右心室和室间隔，保留左心室，去除内、外膜，PBS清洗。

3. 用眼科剪将心室肌剪碎至约1mm3，滴加1ml胎牛血清，均匀接种于6cm细胞培养皿内，组织块间隔1-2mm，放入5% CO2，37℃恒温培养箱内培养。

4. 4小时后去除培养皿，加入3ml含有20%FBS和1%双抗的H-DMEM培养基，继续培养。

5. 一般情况下48小时后可见有细胞爬出，换新鲜培养基继续培养。

6. 5-7天后有大量细胞铺满皿底，弃去培养基，用PBS清洗一遍，加入2ml胰酶进行消化1分钟左右。

7. 吸去胰酶。加入完全培养基终止反应，并用移液器反复吹打。

8. 倾斜培养皿稍等片刻，让组织块沉淀后吸去上层细胞悬液，70μm细胞筛过滤后接种至12孔板为后续共培养试验做准备。