菲罗门多糖型手性色谱柱的使用及维护

正相涂敷型固定相

Chiral ND,ND(2), NQ(2),NS(2),NT(2),NX(2), NY(2),NZ(2), MB(2), MC(2), MF(2), MG(2), MD,MD(2),MJ(2),MQ(2),MX(2), MZ(2)

正相键合型固定相

Chiral INA, INB, INC, INJ

反相涂敷型固定相

Chiral ND(2)-RH, NQ(2)-RH, NS(2)-RH,NX(2)-RH, NY(2)-RH,NZ(2)-RH,MD(2)-RH, MJ(2)-RH,MQ(2)-RH,MX(2)-RH, MZ(2)-RH

酸性样品

碱性样品

常规一般使用

三氟乙酸，甲酸

(0.1%-0.5%)

二乙胺

(0.1%-0.5%)

考虑继续调整峰形使用

甲磺酸

(0.1%)

三乙胺、乙醇胺、正丁胺

(0.1%-0.5%)

特别需要时，酸性与碱性添加剂可以同时添加，建议各 0.1%

添加剂适合正相以及 SFC 超临界流体，以及反相（反相应用时，建议 0.05%-0.1%）

１

2

起始条件

HEX:IPA=80:20

HEX:EtOH=80:20

调整范围

HEX 99%至 50%之间

HEX 99%至 50%之间

HEX:正己烷，IPA:异丙醇，EtOH:无水乙醇

HEX 比例增加，保留时间会变长

IPA 与 EtOH 一般比例不超过 50%，遇到极性特别大的样品，允许最高至 95%，正常

情况控制在 50%以下

起始柱温为 25℃，起始流速建议在 0.8ml/min 左右。有条件的情况下，温度在 5-25℃ 内调整，对分离度可能产生大的影响。温度低有时利于拆分，温度高，出峰快，峰形

可能更尖锐

Chiral MF(2), Chiral MG(2)流动相中不能用乙醇

正相涂敷型手性固定相不能接触下列溶剂：甲基叔丁基醚(MtBE)，二氯甲烷(DCM)，

四氢呋喃(THF)，乙酸乙酯(EtOAc)，氯仿(CHCl3)，丙酮等

１

２

起始条件

HEX:IPA=80:20

HEX:EtOH=80:20

调整范围

HEX 99%至 50%之间

HEX 99%至 50%之间

3

4

起始条件

MtBE:EtOH=98:2

HEX:DCM=50:50

调整范围

MtBE 98%至 60%之间

HEX 85%至 50%之间

5

6

起始条件

HEX:THF=70:30

HEX:EtOAc=50:50

调整范围

HEX 99%至 70%之间

HEX 99%至 50%之间

7

8

起始条件

HEX:CHCl3=30:70

ACN:IPA(或 MeOH)＝100:0

调整范围

HEX 60%至 100%之间

ACN 100%至 90%之间

HEX 比例增加，保留时间会变长

除了上述溶剂，溶解与洗脱的必要性下，丙酮以及 1,4 二氧六环也可使用

起始柱温为 25℃，起始流速建议在 0.8ml/min 左右。有条件的情况下，温度在 5-25℃ 内调整，对分离度可能产生大的影响。温度低有时利于拆分，温度高，出峰快，峰形

可能更尖锐

酸性及两性化合物

碱性化合物

中性化合物

水相 40%

0.1%甲酸水

0.1% TFA

水

0.1% TFA 水

PH=2 100mM 高

氯酸钠水溶液

PH=2.5 50mM 磷酸

缓冲盐

PH=2.5 100mM 六

氟磷酸钾水溶液

0.1%磷酸水

20mM 碳酸氢铵水

溶液（PH=9）

PH=2 100mM 高 氯

酸钠水溶液

20mM 碳酸氢铵水溶液（PH=9），含0.1% DEA

PH=2 100mM 六 氟

磷酸钾水溶液

有机相 60%

ACN, MeOH, IPA

常规清洗

HEX:IPA=80:20 0.4ml/min 1-2 小时并直接保存

柱效下降，峰形不正常时可能的特殊残留物清洗，再生

酸性残留

碱性残留物

性质不确定的残留物

EtOH(0.1% DEA)

0.2ml/min 2 小 时

EtOH(0.1% TFA)

0.2ml/min 2 小 时

第 1 步 EtOH(0.1% TFA)

0.2ml/min 2 小 时

第 2 步 EtOH(0.1% DEA)

0.2ml/min 2 小 时

清洗完毕后，再用 HEX:IPA=80:20 0.4ml/min 1 小时，并按 COA 测试后直接保存

EtOH 不适用于 Chiral MF(2)与 Chiral MG(2)固定相。Chiral INB, INC 可用 EtOAc 再生

说明：如果是柱头堵塞与污染，可以 0.2ml/min 流速倒冲

常规清洗

ACN:H2O=10:90 0.5ml/min 1 小时，ACN:H2O=90:10 0.5ml/min 1 小时,保存于

ACN:H2O=75:25（或 60:40）体系中

柱效，柱压，峰形问题时，特殊残留物的清洗，再生

第１步：MeOH:H2O=10:90(含 0.1% TFA ) 0.2ml/min 1 小时

第２步：MeOH:H2O=90:10(含 0.1% TFA ) 0.2ml/min 1 小时

第３步：MeOH:H2O=99:1(含 0.1% TFA ) 0.2ml/min 2 小时

第 4 步：ACN:H2O=75:25 0.5ml/min 30 分钟，并按 COA 测试后直接保存

说明：如果是柱头堵塞与污染，可以 0.2ml/min 流速倒冲

所有正，反相手性柱启用时，建议流动相下 0.2ml/min 流速先运行 10 分钟，再提升到

0.5ml/min 流速运行 5 分钟，再提升到需要运行的流速

正相涂敷型与键合型手性柱，都可以在正相体系，SFC 体系(甲醇与液态二氧化碳体系) 以及 PO 极性体系（纯 ACN 或纯 MeOH 为流动相，或者含 5%的 IPA）切换使用。从一种体系切换到另一种体系时，需用 20 倍柱体积的 IPA 以 0.2ml/min 冲洗以切换。按

250*4.6mm 柱计算，20 倍柱体积约 50ml

键合型手性柱，出厂在正相体系中，如果要转化为反相柱使用，需用 20 倍柱体积的

IPA 以 0.2ml/min 冲洗后，再用反相体系冲洗转化为反相柱，之后按反相柱的操作进

行。一旦转化为反相手性柱，则不能再切换回正相